Complexos naturais altamente diluídos alteram parâmetros de malignidade em melanoma murino

Abstract

Resumo: O melanoma compreende a maior causa de morte por cancer de pele, pois e altamente refratario as terapias existentes. Celulas tumorais apresentam mutacoes somaticas responsaveis pela ativacao constitutiva de vias de sinalizacao que normalmente seriam ativadas pela interacao de fatores de crescimento com seus receptores. Uma vez ativas em celulas de melanoma, essas vias levam a proliferacao continua das celulas e, consequentemente, a progressao da doenca ao promover escape da morte celular, expressao de oncogenes, invasividade, angiogenese e metastase. Alem disso, essas celulas apresentam alteracoes em diversas moleculas de adesao a outras celulas e a matriz extracelular, o que contribui para seu fenotipo agressivo e invasivo. As celulas cancerosas, apesar de suas caracteristicas fenotipicas adquiridas por alteracoes geneticas e epigeneticas, nao agem sozinhas no desenvolvimento da doenca. Os fibroblastos associados ao cancer estao envolvidos em todos os processos que levam as transformacoes fisiologicas que permitem as celulas cancerosas tornarem-se malignas, como a producao de moleculas de matriz extracelular e de proteinas de remodelacao dessa matriz, fornecendo sinais para a sobrevivencia, invasao e proliferacao das celulas cancerosas. Terapias para pacientes portadores de cancer, que utilizam altas diluicoes de compostos naturais, apresentam evidencias de eficacia, levando a melhoria do bem-estar. Nosso grupo de pesquisa tem obtido resultados interessantes com complexos naturais altamente diluidos, denominados M1 ou M8, em especial em melanoma, com estudos in vitro e in vivo. Dessa forma, esse trabalho teve como objetivo entender de que forma M1 ou M8 atuam sobre os mecanismos moleculares de celulas de melanoma murino in vitro, resultando na reducao de suas caracteristicas metastaticas, bem como avaliar se induzem algum tipo de alteracao no processo de comunicacao entre essas celulas cancerosas e fibroblastos. Os resultados obtidos mostraram que o tratamento com M1 foi capaz de reduzir a marcacao das celulas B16-F10 para N-caderina e aumentar para CD54, enquanto M8 reduziu as marcacoes para N-caderina e tambem CD44. Ambos tratamentos nao alteraram a marcacao para NG2, LAMP-1 e ƒÀ-catenina, bem como a ativacao de AKT. Ambos tratamentos com M1 ou M8 reduziram a capacidade das celulas B16-F10 de formar colonias a partir de si. Quando as celulas B16-F10 foram cocultivadas com fibroblastos Balb/3T3 nao houve alteracao na marcacao para CD44 e ƒ¿-SMA apos ambos os tratamentos. M8 foi capaz de inibir a sintese/liberacao de acido hialuronico no sobrenadante da cocultura, bem como a marcacao para N-caderina no extrato celular. Tanto M1 quanto M8 nao causam alteracoes nos padroes de proliferacao e viabilidade quando aplicados sobre os fibroblastos isolados. A atividade da MMP-2 secretada no sobrenadante das culturas nao foi alterada para B16-F10, porem mostrou-se reduzida na cocultura. Com esse trabalho foi possivel demonstrar que os tratamentos com M1 e com M8, alem de seguros possuem atividade seletiva modulando as caracteristicas tumorais, levando-as a um fenotipo de menor malignidade. Palavras-chave: B16-F10. Altas diluicoes. Moleculas de adesao. Comunicacao celular. Microambiente tumoral.

Abstract: Melanoma comprises the leading cause of death from skin cancer, especially because it is highly refractory to existing therapies. Tumor cells exhibit somatic mutations responsible for constitutive activation of signaling pathways that would normally be activated by the interaction of growth factors with their receptors. Once active in melanoma cells, these pathways lead to continued cells proliferation and, therefore, the disease progression by promoting cell death scape, oncogene expression, cell survival, invasiveness, angiogenesis and metastasis. Moreover, these cells present changes in several adhesion molecules to other cells and to the extracellular matrix that contributes to their aggressive and invasive phenotype. Cancer cells, despite their phenotypic characteristics acquired by genetic and epigenetic alterations, do not act alone in the development of the disease. Cancer-associated fibroblasts are involved in all the processes leading to physiological changes that allow cancer cells to become malignant, such as the production of extracellular matrix molecules, and its remodeling, providing survival signals, and promoting cancer cells invasion and proliferation. Therapies for cancer patients using high dilutions of natural compounds present evidence of efficacy leading to improved welfare. Our research group has obtained interesting in vitro and in vivo results with highly diluted natural complexes, called M1 and M8, particularly in melanoma studies. Thus, this study aimed to understand how M1 and M8 act on the molecular mechanisms of murine melanoma cells in vitro, resulting in reduced metastatic characteristics and also assess whether they induce changes in the communication process between these cancerous cells and fibroblasts. The results showed that treatment with M1 was able to reduce B16-F10 cells labeling for N-cadherin and increase to CD54, while M8 reduced N-cadherin and CD44 labeling. No alterations were observed on NG2, LAMP-1, ?-catenin, and AKT activation; on the other hand, B16-F10 colony formation capacity was decreased by both treatments. When B16-F10 cells were co-cultured with Balb/3T3 fibroblasts there were no changes in CD44 and ?-SMA labeling after both treatments. M8 was able to inhibit hyaluronic acid synthesis/release by cells to coculture supernatant, as well as N-cadherin cell expression. Fibroblasts proliferation and viability were not altered by any treatment. The activity of MMP-2 secreted into the cultures supernatant was not changed for B16-F10 alone but was reduced in coculture with fibroblasts. The current work demonstrated that treatments with M1 and M8 are safe and have selective activity modulating tumor characteristics, leading to a less malignant phenotype. Keywords: B16-F10. High dilutions. Adhesion molecules. Cell communication. Tumor microenvironment.