Toxinas Loxoscélicas : estudo e conservação biológica por meio de imunoensaios

Abstract

Resumo:As aranhas do gênero Loxosceles (aranha marrom) estão entre os animais venenosos envolvidos com acidentes em humanos. A picada da aranha marrom pode provocar reações cutâneas locais e/ou reações sistêmicas, podendo levar à falência renal e óbito. O quadro clínico desencadeado pelo veneno nas vítimas denomina-se Loxoscelismo. As espécies de maior ocorrência no estado do Paraná são: L. intermedia, L. gaucho e L. laeta. Várias proteínas do veneno total de Loxosceles intermedia já foram estudadas e caracterizadas, como fosfolipases-D, metaloproteases do tipo astacinas, hialuronidase, peptídeos inseticidas, TCTP, entre outras. Este trabalho tem como objetivo principal o estudo da conservação biológica de epítopos imunogênicos de toxinas presentes nos venenos das aranhas do gênero Loxosceles que prevalecem no estado do Paraná. Este estudo utiliza como bioferramentas anticorpos policlonais, produzidos em coelhos, que reconhecem o veneno total de cada uma das três espécies de aranhas marrom, bem como diferentes toxinas loxoscélicas recombinantes de L. intermedia (isoformas de fosfolipases-D: LiRecDT1, LiRecDT2, LiRecDT3, LiRecDT5, LiRecDT6; isoforma de metaloprotease do tipo astacina: LALP1; hialuronidase; peptídeo inseticida: LiKp e TCTP). O reconhecimento de toxinas presentes nos três venenos de Loxosceles pelos soros policlonais que reconhecem as diferentes toxinas recombinantes de Loxosceles intermedia também foi avaliado. O reconhecimento imunogênico foi avaliado por meio de imunoensaios que reconhecem epítopos conformacionais (técnica de ELISA) e epítopos lineares (técnica de western-blotting). Os resultados obtidos revelam que as toxinas dos venenos das espécies de aranha marrom L. intermedia, L. gaucho e L. laeta apresentam conservação biológica de epítopos imunogênicos, reforçando a ideia de famílias de toxinas loxoscélicas inter-espécies. As reações cruzadas nos imunoensaios evidenciam a aplicabilidade biotecnológica de antissoros e toxinas recombinantes na prevenção, diagnóstico e tratamento do Loxoscelismo, bem como na toxinologia de forma geral.

Abstract: Spiders from Loxosceles genus (brown spiders) are among the venomous animals involved in human accidents. Brown spider bites are associated with lesions including dermonecrosis, along with systemic problems that may cause renal failure and death. Clinical effects evoked by the venom in the victims is named Loxoscelism. The main species found in the state of Paraná are L. intermedia, L. gaucho e L. laeta.Several proteins from Loxosceles intermedia have already been studied and characterized as: fosfolipases-D, metalloproteases from astacin family, hyaluronidase, insecticidal peptides, TCTP, etc. The present work aimed the study of the biological conservation of immunogenic epitopes from toxins found in the venom of Loxosceles, which are common in Paraná. This study used as biotools: polyclonal antibodies, raised in rabbits, which recognizes the venom from each of the three brown spider species; and different recombinant toxins from L. intermedia (fosfolipase-D isoforms: LiRecDT1, LiRecDT2, LiRecDT3, LiRecDT5, LiRecDT6; LALP1: astacin metaloprotease; LiKp: inseticidal peptide and TCTP). The recognition of toxins from the three different Loxosceles venoms by the polyclonal serum raised against each of the L. intermedia recombinant toxins mentioned above was also performed. In order to evaluate the immunogenic recognition, imunoassays that analyse conformational epitopes (ELISA) and that analyse linear epitopes (western-blotting) were used. The results show that the toxins from the venom of the three species studied herein, L. intermedia, L. gaucho e L. laeta, present biological conservation of immunogenic epitopes, reinforcing the idea of families of toxins throughout the genus. The cross-reactivity in the immunological studies point to the biotechnological applications of antiserum and recombinant toxins at prevention, diagnosis and treatment of Loxocelism, as well as, in the toxinology field in general.