Variabilidade genética e biomarcadores associados ao diabetes gestacional

Abstract

Resumo: O diabetes mellitus gestacional (diabetes gestacional, DMG) é definido como a intolerância à glucose diagnosticada durante a gestação e que claramente não é diabetes prévio ou manifesto. No Brasil afeta cerca de 4-7% das gestações sendo fator predisponente para o aumento da morbidade na gestante, feto e neonato. O objetivo do trabalho foi associar a variabilidade genética de sítios polimórficos A3243G do mtDNA, rs10885122 do gene ADRA2A, rs2237892 do gene KCNQ1, rs1801282 do gene PPARg, rs5393 do gene SLC2A2 e rs3758947 do gene ABCC8 com o diabetes gestacional, bem como buscar biomarcadores para a patologia. A amostra foi composta de 814 gestantes (89,7% Euro-Brasileiras), classificadas em gestantes saudáveis (CTRL, n=506) e portadoras de diabetes gestacional (DMG, n=308). O projeto teve aprovação do Comitê de Ética em Pesquisa com seres Humanos do HC-UFPR (CEP/SD: 927.052.10.05 e CAAE: 1924.0.000.091-10). As gestantes do grupo DMG apresentaram (mediana) idade (32 vs 26 anos, P<0,001) e IMC (32 vs 24 kg/m2) significativamente maiores em relação ao grupo controle. A glicemia em jejum foi significativamente diferente entre os grupos DMG e controle (93 vs 82 mg/dL, P<0,001) e a concentração média de HbA1C no grupo DMG (5,6%) sugere um grupo com bom controle glicêmico. O único parâmetro avaliado que não apresentou diferença significativa entre os grupos foi o HDL-C (P=0,596). As genotipagens foram realizadas com sondas fluorescentes (sistema TaqMan) ou PCR-RFLP (mtDNA). As variantes estudadas se encontraram dentro do equilíbrio de Hardy-Weinberg e não foram associadas ao diabetes mellitus gestacional na população sul-Brasileira avaliada. Uma associação entre o índice de massa corpórea (IMC) e a variante rs10885122 do gene ADRA2A foi encontrada no DMG, evidenciando que portadoras do alelo T (GT+TT) apresentaram um incremento em média de 2,03 kg/m2 quando comparadas a homozigotos GG. Gestantes saudáveis portadoras do alelo G da variante rs1801282 do gene PPARg (genótipos CG + GG; Pro/Ala + Ala/Ala) apresentaram um aumento significativo (P=0,003) no IMC, de 2,2 kg/m2 em média, quando comparadas aos homozigotos CC (Pro/Pro). Gestantes diabéticas portadoras da presença do alelo G (genótipos CG + GG; Pro/Ala+Ala/Ala) apresentaram concentrações séricas maiores de HDL-C em relação às portadoras do alelo C (genótipo CC; Pro/Pro). Gestantes com diabetes gestacional portadoras da presença do alelo T (genótipos CT+TT) do polimorfismo rs3758947 do gene ABCC8 apresentaram um aumento na concentração sérica do 1,5 anidroglucitol quando comparadas às portadoras do genótipo CC, sugerindo melhor controle glicêmico. As concentrações séricas dos produtos de glicação avançada (AGEs), carboximetilisina e pentosidina, quantificadas por LC-MS/MS, são significativamente maiores (P<0,05) em gestantes diabéticas quando comparadas às saudáveis. O índice aterogênico do plasma calculado pelo Log(TG/HDL-C) permitiu a identificação de mulheres com baixo risco para o desenvolvimento de diabetes mellitus gestacional antes das 24 semanas de gestação. Gestantes com Log(TG/HDL-C) menor que 0,454 antes da 24ª semana de gestação, apresentam risco menor para o diabetes mellitus gestacional, sendo este parâmetro sugerido para a triagem do DMG.

Abstract: Gestational diabetes mellitus (gestational diabetes, GDM) is defined as glucose intolerance diagnosed in pregnancy and that is not overt diabetes. The frequency of GDM in the Brazilian population is between 4-7% of pregnancies. The objective of this study, was to associate the genetic variability of polymorphic sites A3243G of mtDNA, rs10885122 of ADRA2A gene, rs2237892 of KCNQ1 gene, rs1801282 of PPARg gene, rs5393 of SLC2A2 gene and rs3758947 of ABCC8 gene with gestational diabetes and investigate for association between laboratorial parameters and the disease. The sample consisted of 814 women (89,7% Euro-Brazilian), classified as healthy (control group, n = 506) and patients with gestational diabetes (GDM group, n = 308). The project was approved by the Ethics in Human Research of the HC-UFPR (CEP / SD: 927.052.10.05 and CAAE: 1924.0.000.091-10). Women in the GDM group had a median age higher than the controls (32 vs 26 years, P<0,001) and higher body mass index (BMI) (32 vs 24 kg/m2). Fasting glucose was different between GDM and control group (93 vs 82 mg/dL, P<0,001) and mean HbA1C concentration (5,6%) in GDM group suggests a group with a good glycemic control. Only HDL-C was not different between the groups (P=0,596). The genotyping was performed with fluorescent probes (TaqMan system) or with PCR-RFLP (mtDNA). The studied variants were in the Hardy-Weinberg equilibrium and were not associated with gestational diabetes mellitus in the South Brazilian population. An association between pregnant women with GDM and BMI were found. Carriers of T allele (GT+TT) of ADRA2A gene have higher BMI (2,03kg/m2) than those carriers of G allele. Health pregnant women carrier of G allele (CG+GG; Pro/Ala+Ala/Ala) of PPARg gene have higher BMI (2,2kg/m2) than those women carrier of C allele (CC; Pro/Pro; P=0,003). For the same SNP, pregnant women with GDM and carrying G (CG+GG; Pro/Ala+Ala/Ala) allele have higher HDL-C levels than those carrying C allele (CC; Pro/Pro). For the ABCC8 gene, pregnant women with GDM have higher concentration of 1,5 anhydroglucitol when carrying T allele (CT+TT) than those carrying C allele (CC). This fact suggests that these women have better glycemic control. Serum concentration of advanced glycation end products (AGEs), carboxymethyllysine and pentosidina, quantified by LC-MS/MS, are higher in GDM group (P<0,05) when compared with health pregnant women. The atherogenic index of plasma (AIP), calculated as Log(TG/HDL-C), is a valuable index to identify pregnant women with low risk of gestational diabetes before the 24th week of pregnancy. Pregnant women with AIP bellow 0,454 have low probability of gestational diabetes mellitus in early pregnancy (before 24th week of pregnancy). This index could help the screening for GDM.

Résumé: Le diabète gestationnel (DMG) est défini comme une intolérance au glucose diagnostiquée pendant la grossesse sans antécédents de diabète. Au Brésil, le DMG concerne environ 4-7% des grossesses et constitue un facteur prédisposant à une augmentation de la morbidité chez les femmes enceintes, les foetus et les nouveauxnés. L'objectif de cette étude était d'associer la variabilité génétique des sites polymorphes A3243G du mtDNA, le rs10885122 du gène ADRA2A, rs2237892 du gène KCNQ1, rs1801282 du gène PPARg, rs5393 de gène SLC2A2 et rs3758947 du gène ABCC8 avec le diabète gestationnel et de rechercher des biomarqueurs pour la pathologie. L'échantillon était composé de 814 femmes (89,7 % Euro - brésiliens), dont 506 femmes enceintes en bonne santé (CTRL) et 308 femmes présentant un diabète gestationnel (DMG). Le projet a été approuvé par le Comité d'éthique de l'HC- UFPR (CEP / SD : 927.052.10.05 et CAAE : 1924.0.000.091-10). Les femmes du groupe DMG ont un âge médian (32 vs 26 ans, p <0,001) et d'indice médian de masse corporelle (IMC) (32 vs 24 kg/m²) plus élevés que pour le groupe CTRL. La glycémie à jeun était significativement différente entre les groupes DMG et CTRL (93 vs 82 mg/dl, P< 0,001) alors que la concentration moyenne de l'HbA1C dans le groupe DMG (5,6%) indiquait un bon équilibre glycémique pour ce groupe. Le seul paramètre ne variant pas significativement entre les deux groupes était HDL-C (P= 0,596). Le génotypage a été réalisée avec des sondes fluorescentes (système TaqMan) ou avec le PCR-RFLP (mtDNA). Les variantes étudiées étaient dans l'équilibre de Hardy -Weinberg et n'étaient pas associées au diabète gestationnel dans la population du Sud du Brésil évalué. Une association entre l'IMC et le polymorphisme rs10885122 du gène ADRA2A a été trouvé dans le DMG, montrant que les porteurs de l'allèle T (GT+TT) présentaient une augmentation moyenne de 2,03 kg/m2 par rapport à homozygotes GG. Les femmes enceintes du groupe contrôle et porteuses de l'allèle G de la variant rs1801282 du gène PPARg (génotypes CG+GG, Pro/Ala+Ala/Ala) présentaient une augmentation significative (P= 0,003) de l'IMC de 2,2 kg/m2 en moyenne, par rapport aux homozygotes CC (Pro/Pro). Les femmes diabétiques porteuses de l'allèle G (génotypes CG+GG, Pro/Ala+Ala/Ala) avaient des concentrations sériques plus élevés de HDL-C par rapport à porteurs de l'allèle C (génotype CC, Pro/Pro). Les patientes présentant un diabète gestationnel et porteuses de l'allèle T (génotypes CT+TT) de la variant rs3758947 du gène ABCC8 avaient une augmentation de la concentration sérique de 1,5 anhydroglucitol par rapport aux porteurs du génotype CC, suggérant un meilleur contrôle glycémique. Les concentrations sériques de produits de glycation avancée (AGEs), pentosidine et carboxymethyllisine, quantifiés par LC-MS/MS, sont significativement plus élevés (P<0,05) chez les femmes diabétiques par rapport aux sujets du groupe CTRL. L'indice athérogène de plasma (AIP) calculée par le rapport (TG/HDL-C) a permis l'identification des femmes à faible risque de développer un diabète gestationnel avant 24 semaines de grossesse. Les femmes enceintes avec AIP inférieure à 0454, avant la 24e semaine de grossesse, ont un risque moindre de diabète gestationnel. Ce paramètre peut donc être proposé pour le dépistage du DMG.