Produção de proteínas recombinantes ESAT-6, CFP-10 e MTSP-11

Abstract

Resumo: A tuberculose bovina (TB) é causada pelo Mycobacterium bovis e aflige rebanhos em vários países do mundo. Estima-se que a doença leva a perdas anuais de três bilhões de dólares na agropecuária mundial, além da sua importância para a saúde pública. A prevalência e incidência da doença vêm decaindo nos últimos anos como resultado direto de programas de erradicação e controle de tuberculose. No Brasil, a TB é endêmica e o Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento criou em 2001 o programa brasileiro de controle desta doença. Neste programa, a principal ferramenta para o diagnóstico é o teste alérgico-cutâneo, que apresenta dificuldades técnicas de produção pelo lento crescimento do microrganismo. A fim de aprimorar esta tecnologia, a utilização de antígenos recombinantes mostra-se como alternativa promissora. O presente trabalho teve por objetivo a produção das proteínas recombinantes ESAT-6, CFP-10 e MTSP-11 por fermentação de Escherichia coli e purificação através de metodologias aplicáveis industrialmente. Para redução do tempo de escalonamento, foi padronizada uma metodologia de produção de préinóculos transformados, que permaneceram estáveis por um ano quando mantidos a - 80°C. O processo de fermentação e produção das proteínas recombinantes foi realizado em agitador de bancada a 37°C e 200 rpm por 3 horas, levando à expressão das proteínas na forma de corpos de inclusão. Estes corpos foram solubilizados em tampão com uréia e purificados por cromatografia de afinidade em resina de níquel após rompimento celular por sonicação. As proteínas foram eluídas com alta pureza, e suas concentrações foram padronizadas por ultrafiltração. Ao final do processo, obteve-se altos rendimentos proteicos, 23,9 mg, 22,7 mg e 143,5 mg por litro de fermentado para as proteínas ESAT-6, CFP-10 e MTSP-11, respectivamente. O alto rendimento obtido e a simplicidade dos processos de fermentação e purificação tornam a metodologia aplicável industrialmente. Estes insumos têm aplicação em diagnósticos com alta especificidade e em vacinas com capacidade de diferenciação de resposta vacinal e infeccional, seguindo as novas tendências nos diagnósticos de tuberculose bovina e humana.