Análise qualitativa e quantitativa das histopatologias causadas pelo organofosforado Azodrin® 400 sobre o tecido branquial do peixe de água doce Piaractus mesopotamicus (Holmberg, 1887) após exposiçao subletal

Abstract

Os impactos em ambientes aquáticos causados pela presença de pesticidas, dentre eles os organofosforados, podem provocar lesões em peixes. Assim, os efeitos o organofosforado Azodrin® 400 cujo princípio ativo é o monocrotofós, sobre as brânquias de juvenis de Piaractus mesopotamicus (pacu), foram investigados. Os peixes foram aclimatados às condições laboratoriais por uma semana. Para a determinação da faixa subletal do organofosforado Azodrin® 400, foram testadas as concentrações 6 mg/L, 3 mg/L, 1,5 mg/L e 0,75 mg/L. A faixa subletal obtida ficou entre 0.75 mg/L e 1.5 mg/L. Assim, a concentração utilizada para os testes em nível subletal foi 1,08 mg/L do organofosforado. Após a aclimatação os peixes foram expostos, via hídrica, a 1,08 mg/L do organofosforado. Os tecidos foram coletadas nos tempos 1h, 4h, 12h, 24h, 48h, 72h e 96h de exposição. Os peixes foram sacrificados após secção medular e a segunda brânquia direita foi fixada em Alfac e processada para microscopia de luz. Os cortes foram corados em Hematoxilina e Eosina (HE) e as imagens foram capturadas em fotomicroscópio Olympus BX 51 acoplado a computador através do programa Image-Pro Express. Para o estudo ultraestrutural, amostras da segunda brânquia esquerda foram fixadas em Karnovsky e em tampão cacodilato 0,2 M, pH 7,2, pós fixadas em tetróxido de ósmio 2%, pH 7,2, tratadas com acetato de uranila, desidratadas em série alcoólica crescente e emblocadas em resina (Poly/EMBED 812). Os cortes ultrafinos foram contrastados com acetato de uranila 2% e Reynolds. Para o estudo ultraestrutural micrografias foram capturadas em microscópio eletrônico de transmissão e as patologias descritas e quantificadas foram: o descolamento epitelial, hiperplasia, fusão e aneurisma. O descolamento epitelial foi quantificado a partir de uma classificação estabelecida neste trabalho em mínimo, brando, moderado, severo e intenso. O descolamento foi encontrado em todos os tempos analisados, sendo mais intenso após 48 horas de exposição. Hiperplasia de células epiteliais foi mais freqüente após 24 horas de exposição. A fusão entre lamelas secundárias adjacentes foi predominante em 96 horas de exposição. O aneurisma foi mais freqüente após 12 horas de exposição. Estas histopatologias sugerem diminuição na eficiência das trocas gasosas com conseqüentes danos para a saúde dos juvenis de pacu

The impacts caused by the presence of pesticides in aquatic environments, amongst them the organophosphorus (OP), can induce injuries in fish. Thus, the changes of the gills in juvenile Piaractus mesopotamicus (pacu), caused by sublethal level of the OP Azodrin® 400 (active principle monocrotophos) were investigated. The fish were acclimatized to laboratory conditions for one week. For the determination of the sublethal concentration of the organophosphorus Azodrin® 400, bioasays were done the concentrations 6 mg/L, 3 mg/L, 1.5 mg/L and 0.75 mg/L. The sublethal level lies between 0.75 mg/L and 1.5 mg/L. Thus, the concentration used for the tests at sublethal level was 1.08 mg/L of OP. After the acclimatization, the fish were exposed to 1.08 mg/L of the OP in water. Tissues were collected after 1h, 4h, 12h, 24h, 48h, 72h and 96h of exposure. Fish were sacrificed after medular section and the second right gill was fixed in Alfac and routine processed for light microscopy. Sections were stained in Hematoxylin and Eosin (HE) and the images were captured by means of an Olympus photomicroscope connected to a computer, through the Image-Pro Express program. For the ultrastructural study, samples of the second left gill were fixed in Karnovsky and 0.2 M cacodylate, pH 7.2, post-fixed in osmium tetroxyde 2%, pH 7.2, treated with uranyl acetate, dehydrated in graded series of ethanol, and embedded in Poly/EMBED 812 resin. The ultrafine sections (30-50 nm) were contrasted with uranyle acetate 2% and Reynolds. For the ultrastructural study, micrographs were captured from an electron microscope and the following pathological features described and quantified: epithelial detachment, hyperplasia, fusion of lamellae and aneurism. The epithelial detachment was quantified based on a classification established in this work, as minimal, soft, moderate, severe and intense. The detachment was found in all analyzed times, and higher intensity and intense detachment after 48 hours of exposure. The hyperplasia of epithelial cells was more frequent after 24 hours of exposure. The fusion between adjacent secondary lamellae was predominant after 96 hours of exposure. Aneurysms were more frequent after 12 hours of exposure. These histopathological suggest a reduction in the efficiency of the gaseous exchanges with consequent damages for the health of juvenil pacu.