Fitoquímica e ensaios biológicos do extrato bruto etanólico, frações e substâncias isoladas provenientes das cascas de Geissospermum vellosii Allemão (Apocynaceae)

Abstract

Resumo

Resumo: Este trabalho teve como objetivo realizar o estudo fitoquímico e biológico do extrato etanólico, frações e constituintes isolados provenientes das cascas de Geissospermum vellosii Allemão (Apocynaceae). O extrato etanólico foi fracionado obtendo-se as frações diclorometano, acetato de etila, butanol e hidroalcóolica remanescente. A fração diclorometano foi submetida à cromatografia em coluna e foram isolados os constituintes (1), (3), F12 e F14. A substância (2) foi obtida após a purificação da F12 por CLAE semi-preparativa. A substância (1) foi identificada como lupeol, a (2) como (+)-sesamina, a (3) como (+)-aspidospermina e a F14 como a mistura de sesamina e aspidospermina. O extrato etanolico e frações foram submetidos à atividade alelopática por meio de caixa de poliestireno e placa de Petri; a amostra F12 e aspidospermina por meio de caixa de poliestireno e cromatoplaca; e o lupeol por meio de cromatoplaca. As amostras testadas nos ensaios alelopáticos apresentaram vários resultados sobre Triticum aestivum L. e Lactuca sativa L. Os resultados demostraram o potencial fitotóxico em mono e dicotiledôneas com influência na germinação, crescimento, respiração, teor de clorofila, atividade enzimática, índice mitótico e capacidade de recuperação. A atividade antibacteriana do extrato etanólico, frações, F12 e aspidospermina foi realizada por meio de disco difusão e MIC; e da fração diclorometano, aspidospermina e F12 por meio de bioautografia. No ensaio de disco difusão não foi verificada a inibição das bactérias testadas. No ensaio de CIM verificou-se que o extrato etanólico e a fração butanol inibiram o crescimento de S. aureus. No ensaio bioautográfico a fração diclorometano inibiu o crescimento de S. aureus, E. coli, S. epidermidis e S. typhimurium, e a aspidospermina inibiu o crescimento de S. epidermidis e S. typhimurium. A atividade antioxidante da aspidospermina e da fração diclorometano foi investigada. No ensaio antioxidante pelo método do fosfomolibdênio a aspidospermina apresentou uma capacidade antioxidante superior a rutina e inferior ao ácido ascórbico; pelo método do ácido tiobarbitúrico-espécies reativas apresentou atividade semelhante ao BHT na concentração de 1000 e 100 ppm, e ao ácido ascórbico na concentração de 500 e 100 ppm. Na verificação do potencial antioxidante pela atividade das enzimas catalase, peroxidase e superóxido dismutase, as enzimas tiveram suas atividades influenciadas pela aspidospermina e fração diclorometano. O extrato etanólico, frações, F12 e aspidospermina frente a A. salina apresentaram resultados menores que 1000 _g mL-1, indicativo de toxicidade. A aspidospermina, sesamina e F14 apresentaram imunomodulação, sendo capazes de estimular os neutrófilos humanos promovendo a liberação de complexos de oxigênio.

Abstract: This work aimed to carry out the phytochemical and biological study of ethanolic extract, fractions and isolated compounds of barks from Geissospermum vellosii Allemão (Apocynaceae). The ethanolic extract was partitioned resulting in dichloromethane, ethyl acetate, buthanol and remaining hydroethanol fractions. The dichloromethane fraction was submitted to column chromatography and the compounds (1), (3), F12 and F14 were isolated. The substance (2) was obtained after F12 purification by the semi-preparative HPLC. The (1) was identified as lupeol, (2) as (+)-sesamin, (3) as (+)-aspidospermine, and F14 as sesamin and aspidospermine mixture. The ethanolic extract and fractions were submitted in allelopathic activity by way of polystyrene box and Petri plate; the F12 sample and aspidospermine by way of polystyrene box and TLC plate; and the lupeol by way of TLC plate. The samples tested in allelophaty bioassays showed several results on Triticum aestivum L. and Lactuca sativa L. These results demonstrate the phytotoxic potential against monocotyledons and dicotyledons affecting germination, growth, cellular respiration, chlorophyll content, enzymatic activity, mitotic index and recovery capacity. The antibacterial activity of ethanolic extract, F12 and aspidospermine were verified by way of disk diffusion and MIC; and dichloromethane fraction, F12 and aspidospermine by way of bioautography. However, it was not checked inhibition bacterial on the disk diffusion bioassay. The ethanolic extract and buthanol fraction inhibited the S. aureus growth on the MIC bioassay. Dichloromethane fraction inhibited the S. aureus, E. coli, S. epidermidis and S. typhimurium growth, and aspidospermine inhibited the S. epidermidis e S. typhimurium growth on the bioautographic bioassay. The antioxidant activity of aspidospermine and dichloromethane fraction were investigated. The aspidospermine presented a antioxidant capacity higher than rutin, and lower than ascorbic acid on the antioxidant activity by phosphomolybdenum method; by thiobarbituric acid reactive species method, the aspidospermine presented a similar activity as the BHT in a 1000 and 100 ppm concentration, and as ascorbic acid in 500 and 100 ppm concentration. The catalase, peroxidase and superoxide dismutase enzymes had their activities influenced by aspidospermine and dichloromethane fraction on the antioxidant potential verification. The ethanolic extract, fractions, F12 and aspidospermine tested against A. salina showed results lower than 1000 _g mL-1 which indicative a degree of toxicity. The aspidospermine, sesamine and F14 showed immunomodulation, were able to stimulate human neutrophils by releasing of oxygen complexes.