Detecçao molecular do Mycobacterium avium e Mycobacterium tuberculosis em amostras de sangue de pacientes com sindrome da imunodeficiencia adquirida

Abstract

Resumo: Neste estudo avaliou-se a prevalência da infecção disseminada por M. avium e M. tuberculosis em 80 pacientes com Síndrome da Imunodeficiência Adquirida, linfócitos T CD4+ < 100cels/jil e suspeita clínica de infecção por micobactérias. Testou-se a sensibilidade e a especificidade da reação em cadeia da polimerase (PCR) para detectar micobactérias diretamente do sangue periférico quando comparados com os resultados obtidos da hemocultura. Foram realizadas também PCR para identificação das espécies de micobactérias diretamente dos frascos de hemoculturas. Para aumentar a eficácia desta identificação foi necessário aprimorar um método de extração e purificação do DNA das hemoculturas que possibilitou a eliminação de inibidores da reação de amplificação como o polianetol sulfoneto de sódio (SPS) e componentes da heme presentes nos frascos de hemocultura. O método desenvolvido promoveu o aumento da sensibilidade da PCR, permitindo a identificação de micobactérias em 100% dos frascos de hemoculturas positivas. Entre os 80 pacientes analisados, 12 (15%) apresentaram hemoculturas positivas para micobactérias, sendo 7 (8,8%) positivas para M avium e 5 (6,2%) positivas para M. tuberculosis. A PCR realizada diretamente das amostras de sangue periférico foi positiva para M. avium em 3/7 amostras, e negativa para M. tuberculosis. A sensibilidade e a especificidade da PCR do sangue periférico para detecção do M. avium quando comparadas com cultura em Lõwenstein-Jensen foi de 42,9 e 100%, respectivamente. Estes resultados demonstram que a hemocultura é um método mais sensível do que a PCR quando realizada diretamente de amostras de sangue periférico para detecção das micobactérias, porém a PCR permitiu a identificação precoce das espécies de micobactérias dos frascos de hemoculturas. Nos métodos tradicionais a identificação das espécies de micobactérias a partir dos frascos de hemocultura leva em torno de 40 dias, no presente trabalho levou-se em média 3 dias para esta identificação, com um ganho de 37 dias. Pelo fato de que a escolha da terapia, assim como outros cuidados clínicos são dependentes da espécie da micobactéria isolada, a identificação precoce destas espécies através da PCR pode contribuir para um melhor manejo destes pacientes.

Abstract: In this study we evaluated the prevalence of disseminated mycobacterial disease caused by M. avium and M. tuberculosis in eighty AIDS patients with clinical symptoms and CD4 cells <100 cells/|xl. We tested the sensitivity and specificity of Polymerase Chain Reaction (PCR) to detect mycobacteria directly from peripheral blood, when compared with blood culture results as the gold standard. For optimization of PCR detection from blood culture, an efficient DNA extraction method was developed to eliminate the presence of inhibitory substances such as heme compounds and sodium polyanethossulfonate (SPS). A total of 12/80 (15%) patients were positive for mycobacteria in blood culture: seven (8,8%) patients had positive blood culture for M. avium and five (6,2%) for M. tuberculosis. Only 3/12 of the patients with positive blood culture had a positive PCR in the peripheral blood for Mycobacterium avium. None of 5 patients with positive blood culture for M. tuberculosis had a positive PCR in the peripheral blood. The sensitivity and specificity of the PCR method for detection of M. avium in peripheral blood when compared to the results of Lowenstein-Jensen cultures were 42,8% and 100%, respectively. The identification of mycobacteria species using classical methods requires about 40 days. In the present study, the identification of mycobacteria from blood culture fluid by PCR took about 3 days, with an improvement of 37 days in the detection time. These results suggest that blood culture is more sensitive than PCR to detect bacteremia in the peripheral blood, but PCR has improved the turnaround time identification of mycobacterial species from blood cultures fluids. Since the choice of therapy and other medical care are dependent on isolated mycobacteria, an early species identification by PCR might improve the management of these patients.