Caracterização molecular e análise da resistência a antimicrobianos em isolados de micobactérias de crescimento rápido coletados no Paraná

Abstract

Resumo: Microbacterias de crescimento rapido (MCR) estao envolvidas em diversos relatos de infeccoes cirurgicas como mamoplastia, tratamentos esteticos e bacteremia associada a laparoscopia. Tambem tem sido associadas a surtos e pseudo-surtos de infeccao hospitalar. Dentre os fatores citados como predisponentes a estes surtos destaca-se a facilidade destes micro-organismos crescerem em agua destilada, a resistencia a solucao de glutaraldeido e a capacidade de formar biofilmes. Esta tese apresenta um trabalho de caracterizacao molecular e investigacao epidemiologica, e dois trabalhos relacionados a resistencia a antimicrobianos. No primeiro trabalho, 39 casos de infeccoes cirurgicas foram estudados; os isolados foram submetidos ao sequenciamento parcial do gene rpoB, perfil de susceptibilidade a antimicrobianos e analise molecular pela tecnica de pulsed-field gel electrophoresis (PFGE). Trinta e seis isolados foram identificados como Mycobacterium massiliense e os outros tres como M. abscessus, M. chelonae e M. fortuitum. PFGE agrupou os 36 isolados de M. massiliense e mostrou o mesmo padrao (BRA 100) observado em outros tres surtos previamente reportados no Brasil, sugerindo assim uma fonte comum de infeccao para todos os pacientes e a disseminacao da cepa nos hospitais brasileiros. No segundo trabalho, 35 isolados resistentes a ciprofloxacina foram estudados quanto a presenca de mutacoes nos genes gyrA e gyrB e sua relacao com a resistencia a ciprofloxacina. No total, 31 isolados apresentaram uma substituicao no codon 90 (Ala-90 ¨Val) e nenhum isolado apresentou mutacao na posicao Asp-94. No entanto, 4 isolados resistentes a ciprofloxacina e um isolado sensivel nao apresentaram mutacoes em Ala-90 e Asp-94. Nenhuma mutacao no gene gyrB foi observada em nossos isolados de M. massiliense. O terceiro trabalho avaliou a presenca das bombas de efluxo LfrA e Tap em 81 isolados clinicos de MCR (M. massiliense, M. abscessus, M. chelonae e M. fortuitum) e sua relacao com a resistencia a ciprofloxacina e doxiciclina, respectivamente. Uma relacao estatistica significativa (Teste exato de Fisher, P < 0.05) foi mostrada entre a presenca das bombas de efluxo estudadas e a resistencia as quinolonas e tetraciclinas.

Abstract: Rapidly growing mycobacteria (RGM) are associated with human infections after cosmetic procedures, surgery and post-injection. Also has been involved in outbreaks and pseudo-outbreaks. Predisponent factors include ability to develop in distilled water, glutaraldehyde resistance and capacity to develop biofilm. This thesis presents a study on molecular characterization and epidemiological investigation, and two studies in antimicrobial resistance. In the first study, 39 cases of postsurgical infections were studied; all isolates were submitted to rpoB partial gene sequencing for identification, evaluated for their susceptibility to antimicrobial agents and molecular analysis by pulsed-field gel electrophoresis (PFGE). PFGE clustered all 36 M. massiliense isolates and showed the same pattern (BRA 100) observed in three other outbreaks previously reported in Brazil, suggesting a common source of infection for all patients and reinforcing the hypotheses of spread of M. massiliense BRA100 in Brazilian hospital surgical environment in the recent years. In the second study, was investigated a total of 36 Mycobacterium massiliense clinical isolates for their susceptibility to ciprofloxacin and presence of gyrA and gyrB genes mutations. A total of 31 ciprofloxacin-resistant isolates presented an amino acid substitution at codon 90 (Ala-90 ¨Val) and no isolate presented mutation at position Asp-94. Moreover, 4 ciprofloxacin-resistant and one susceptible isolate had no mutation in Ala-90 and Asp-94. No gyrB mutation was observed in all tested M. massiliense isolates. The third study evaluated the presence of LfrA and Tap efflux pumps among clinical isolates of RGM (M. massiliense, M. abscessus, M. chelonae e M. fortuitum) and the correlation with their susceptibility to ciprofloxacin and doxycycline, respectively. The result obtained with 81 clinical isolates included in the study showed a significant correlation (Fisher fs exact test, P = 0.055) between the presence of the efflux pumps and resistance to quinolones or tetracycline.