Obtenção de extrato padronizado de Mucuna Pruriens (L.) DC. e controle da qualidade de matéria-prima e produto contendo Boswellia Serrata Roxb. : desenvolvimento e validação de metodologias analíticas por Clae

Abstract

Resumo: Um dos problemas na pesquisa com produtos naturais é definir quais substâncias são responsáveis pela ação terapêutica e, a partir dessas, definir sua concentração terapêutica. A planta Mucuna pruriens (L.) DC. é usada para o tratamento do mal de Parkinson e a resina de Boswellia serrata Roxb. detêm ação antiinflamatória, sendo essas atividades comprovadas. Entretanto, essas plantas apresentam carência de métodos para a quantificação de marcadores. Uma ferramenta útil nesse caso é a cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), que propicia a separação de compostos e sua quantificação. Esse trabalho teve como objetivos desenvolver métodos de controle de qualidade para as espécies M. pruriens (L.) DC. e B. serrata Roxb., além do desenvolvimento de um extrato padronizado de M. pruriens. Foram utilizadas sementes de M. pruriens (L.) DC. de três variedades (cinza, preta e verde), bem como resina e comprimidos revestidos de B. serrata Roxb. Foram desenvolvidos e validados métodos para o doseamento de levodopa nas sementes e no plasma de animais por CLAE, além de quantificação de compostos fenólicos totais nas sementes por espectrometria no UV. A dopa foi isolada das sementes e sua pureza enantiomérica foi verificada por CLAE quiral. Um extrato padronizado foi desenvolvido com o método de spray drying. Já com a B. serrata, foram desenvolvidos e validados métodos para a quantificação de ácidos boswélicos (ácidos b-boswélico, 11-ceto-b-boswélico e 3-acetil-11-ceto-b-boswélico) por CLAE em resina e em comprimidos revestidos, além da determinação de ácidos totais em resina por titulometria em meio não aquoso. Como resultados, destaca-se que os métodos desenvolvidos para doseamento de levodopa em sementes e no plasma foram precisos, exatos, lineares e robustos, sendo que os teores de levodopa nas variedades apresentaram-se em torno de 4%. O teor de fenólicos totais situou-se em aproximadamente 4%. A dopa isolada foi a L-(S)-dopa. Obteve-se um extrato de mucuna padronizado, com teor de levodopa em torno de 12%. Os dois métodos desenvolvidos para B. serrata apresentaram-se precisos, exatos e robustos. Há, na resina, cerca de 85% de ácidos totais expressos em ácido b-boswélico, com os seguintes teores: 1,73% de ácido 11-ceto-b-boswélico 0,85% de ácido 3-acetil-11- ceto-b-boswélico e 5,56% de ácido b-boswélico; nos comprimidos revestidos foram 0,98% de ácido 11-ceto-b-boswélico, 0,48% de ácido -acetil-11-ceto-b-boswélico e 2,67% e ácido b-boswélico. Conclui-se que todos os métodos desenvolvidos podem ser utilizados em rotina analítica, bem como o extrato de M. pruriens obtido poderá ser aplicado como insumo farmacêutico na produção de um fitoterápico para o Mal de Parkinson.

Abstract: In the natural products research, a problem is to define which substances are responsible for the pharmacological action and about these compounds, to define their therapeutic concentrations. The plant Mucuna pruriens (L.) DC. showed pharmacological activity against Parkinson disease and Boswellia serrata Roxb. resin is used for the treatment of inflammatory diseases, and these actions are confirmed. However, these plants have lack of methods for the markers quantification. A useful tool, in this case, is the High Pressure Liquid Chromatography (HPLC), which provides the separation of compounds and their quantification. The objectives of this work were to develop quality control methods for two species: M. pruriens (L.) DC. e B. serrata Roxb., plus to develop of M. pruriens standardized extract. M. pruriens (L.) DC. seeds (gray, black and green varieties), B. serrata Roxb. resin and coated tablets were used. Methods for levodopa assay in seeds and in animals plasma were developed and validated by HPLC. Total phenolics in seeds were measured by UV spectrometry. The dopa was isolated of the seeds and its enantiomeric purity was showed by chiral HPLC. A standardized extract was obtained with spray drying method. Methods were developed and validated for the analysis from B. serrata, in quantification of boswellic acids (b-boswellic acid – BA, 11-keto-b-boswellic acid – KBA and 3-acetyl-11-keto-b-boswellic acid – AKBA) by HPLC in resin and coated tablets, besides the determination of total acids in resin by titration with non-aqueous medium. As results, the methods for the quantification of levodopa were accurate, precise, linear and robust. The levodopa assay in the varieties was around 4% and total phenolics content was too 4%. The isolated dopa was only L-(S)-dopa. An standardized extract was achieved, with 12% of levodopa. Both B. serrata methods were accurate, precise, linear and robust. There are 85% total acids expressed as BA in B. serrata resin, with com 1.73% KBA; 0.85% AKBA and 5.56% BA. Coated tablets containing 0.98% KBA; 0,48% AKBA and 2,67% BA. All developed methods can be used in analytical routine, and M. pruriens extract can be applied as pharmaceutical material at phytotherapic medication for Parkinson disease.