Caracterização do perfil de expressão de MMPs e de seus inibidores, TIMPs e Reck, em linhagens representativas dos diferentes estágios de progressão do melanona humano

Abstract

Resumo

Resumo: O melanoma é a forma mais agressiva de câncer de pele devido à sua tendência a sofrer metástase, tornando-se mais resistente à grande parte dos tratamentos e levando a um pior prognóstico para os pacientes. Algumas das alterações mais comuns encontradas em melanomas afetam a via Ras/Raf/MEK/ERK, que está envolvida na regulação da expressão de diversos genes supressores de tumor. Um destes genes, chamado RECK (reversion-inducing cysteine-rich protein with Kazal motifs), codifica um inibidor de metaloproteinases de matriz extracelular (MMPs) que é ancorado à membrana citoplasmática. Neste estudo foram quantificados os níveis do transcrito do gene RECK na sua forma canônica e nas recém-identificadas formas resultantes de splicing alternativo (isoformas B, D e I), utilizando a técnica de qRT-PCR, pela primeira vez em linhagens derivadas de lesões de melanoma de crescimento radial (RGP), de crescimento vertical (VGP) e metastático. Também foram quantificados os níveis dos mRNAs de TIMP1, TIMP2, MMP2, MMP9 e MT1MMP, os níveis da proteína RECK e as atividades de MMP-2 e MMP-9. Foi observada uma razão Isoforma B/transcrito canônico de RECK maior no grupo de linhagens metastáticas que no grupo de linhagens RGP+VGP (p=0,0367). Também foi verificado que o transcrito canônico do gene RECK é menos expresso na linhagem metastática WM1617 do que na linhagem derivada de seu tumor primário (WM278) (p=0,0320), enquanto TIMP2 (p=0,0456) e MT1MMP (p=0,0013) são mais expressos na linhagem metastática. Neste mesmo caso a razão Isoforma B/transcrito canônico de RECK também é maior na linhagem metastática (p=0,0432). Já na linhagem 1205Lu os níveis da forma canônica do transcrito de RECK são significativamente maiores que na linhagem WM793, que lhe deu origem (p=0,0089), enquanto TIMP2 (p=0,0468) e MT1MMP (p=0,0011) são menos expressos na linhagem metastática. Estes dados sugerem a possibilidade de que o produto proteico codificado pela isoforma B do transcrito de RECK possa possuir um papel oposto ao do produto canônico na progressão tumoral.

Abstract: Melanoma is the most aggressive form of skin cancer due to its strong tendency to metastasize, becoming resistant to most available therapies, and leading to poor prognosis for the patients. Some of the common transformations displayed bymelanomas affect the Ras/Raf/MEK/ERK pathway, which is involved in regulation of the expression of several tumor-suppressor genes. One of these genes, namely RECK, encodes a membrane-bound matrix metalloproteinase (MMP) inhibitor. Here, both the canonical and the novel alternatively spliced RECK transcripts (isoforms B, D and I) were quantified, using the qRT-PCR technique, for the first time in melanoma cell lines derived from radial growth phase (RGP), vertical growth phase (VGP) and metastatic phase. The mRNA levels for TIMP1, TIMP2, MMP2, MMP9 and MT1MMP, the RECK protein levels and the activities of MMP-2 and MMP-9 were also quantified. A significant increase of the B isoform/canonical RECK transcript ratio in metastatic cell lines was found, when compared to the RGP+VGP group (p=0.0367). It was verified that the canonical RECK transcript was downregulated in the metastatic WM1617 cell line when compared to its primary tumor-derived cell line (WM278), with concomitant high levels of TIMP2 and MT1MMP in the metastatic cell line. In this case, the B Isoform/canonical RECK transcript ratio was also higher in the WM1617 cells (p=0.0432). Conversely, in the metastatic 1205Lu cell line was observed higher canonical RECK transcript levels than in its primary tumor-derived WM793 cell line, with lower levels of TIMP2 (p=0.0468) and MT1MMP (p=0.0011) transcripts on the metastatic cell line. Taken together, these data suggest that, in contrast with the canonical RECK, the B isoform may have a tumor and metastasis promoting role in melanoma progression.