Diagnóstico sorológico, isolamento e caracterização molecular de Toxoplasma gondii (Nicole & Manceaux, 1909) em mulheres gestantes atendidas pelo serviço público na cidade de Curitiba

Abstract

Resumo: O objetivo geral deste estudo foi comparar metodologias diversas de diagnóstico da toxoplasmose em gestantes residentes em Curitiba. O trabalho foi desenvolvido em três etapas. Na primeira foram realizados exames imunoenzimáticos (ELISA) para definição da soroprevalência de anticorpos (IgM, IgG) anti-Toxoplasma gondii em gestantes do programa "Mãe Curitibana" visando conhecer o perfil sorológico destas gestantes. Na segunda foi feito isolamento in vivo e in vitro de Toxoplasma gondii e análise histopatológica a partir de amostras biológicas (liquido amniótico, sangue e placenta) obtidas das gestantes cujo perfil imunológico foi compatível com infecção recente. Na terceira etapa foram avaliadas as técnicas de reação em cadeia da polimerase (PCR) como método diagnóstico e a de polimorfismo do comprimento do fragmento de restrição (RFLP) para determinar o(s) genótipo(s) do parasito. No estudo sorológico de 16.479 pacientes, em que foi possível avaliar as duas imunoglobulinas (IgG e IgM) 8740 apresentaram IgG+ e IgM-; 7203 apresentaram IgG- e IgM-; 24 apresentaram IgG- e IgM+ e 512 gestantes com sorologia positiva para ambas. Treze gestantes com sorologia positiva (IgM+) foram submetidas a amniocentese para isolamento do protozoário. Parasitos provenientes de liquido amniótico e de sangue foram isolados in vivo (inoculação intraperitoneal em camundongos) e in vitro (cultivo celular). A PCR, padronizada no presente trabalho foi eficiente para demonstrar a presença do DNA de Toxoplasma gondii nas 13 amostras de líquido amniótico examinadas. A caracterização molecular do protozoário, por RFLP, indicou que todas as cepas isoladas pertenciam ao genótipo do tipo-I, o que condiz com dados de literatura. Implementações de técnicas de diagnóstico a serem adotadas para o monitoramento da toxoplasmose gestacional são discutidas no presente trabalho.

Abstract: The overall aim of this study was to compare diverse diagnostic methodologies to toxoplasmosis in pregnant women from the city of Curitiba. This study was developed in three parts. In the first part, immunoenzymatic (ELISA) tests were carried out to determine anti-Toxoplasma gondii antibodies (IgM, IgG) seroprevalence in pregnant women participating at the "Mãe Curitibana" program. In the second part, isolation procedures to Toxoplasma gondii (in vivo and in vitro) and also histopathological analysis were done in biological samples (amniotic fluid, blood and placenta) from pregnant women undergoing recent infection immunological profile. In the third part, other techniques were evaluated like the polymerase chain reaction (PCR) as a diagnostic method and the restriction fragment length polymorphisms (RFLP) to determine the genotype(s) of the isolated parasite(s). During the serological study of 16,479 patients, IgG and IgM were simultaneously evaluated, and 8,740 patients presented serological results as IgG+ e IgM-; 7203 were IgG- e IgM-; 24 were IgG- e IgM+ and 512 patients were seroreactive to both immunoglobulines. Thirteen pregnant women showing IgM seroreactivity were submitted to amniocentesis to isolate the protozoarian. Parasites obtained from the amniotic fluid and blood were isolated in vivo (intraperitoneal inoculation in mice) and in vitro (cell culture). The optimized PCR protocol used in this study was efficient to demonstrate the presence of Toxoplasma gondii DNA in all 13 examined amniotic fluid samples. The molecular characterization by RFLP, indicated that all isolated strains belonged to genotype-I, confirming data from literature. Diagnostic technical implementations adopted to gestational toxoplasmosis monitoring will be discussed through this present research work.