Avaliação fitoquímica e determinação do potencial de inibição da enzima H+/K+ ATPase de Achillea millefolium L., Asteraceae

Abstract

Resumo: A espécie Achillea millefolium L., é uma planta pertencente à família Asteraceae, originária da Europa e Ásia, tendo sido introduzida nas Américas e aclimatada no Brasil. A dificuldade em separar taxonomicamente as espécies do gênero, levaram a criação do grupo Achillea millefolium, onde as diferentes espécies apresentam semelhanças morfológicas, anatômicas e genéticas, sendo o número de cromossomos múltiplo de nove. Assim, ocorrem naturalmente, dois subtipos de Achillea millefolium, variando em sua composição genética, uma triplóide com 27 e outra hexaplóide com 54 cromossomos. Esta variação genética reflete-se diretamente na composição química do óleo essencial, que pode ser utilizado para distinguir os subtipos, pois o óleo essencial obtido por hidrodestilação da variedade triplóide é de coloração clara, enquanto a hexaplóide é de colaração azul escura devido à presença de azulenos. Popularmente é utilizada no tratamento do um grande número de doenças, das quais poucas estão cientificamente comprovadas. Estudos anteriores revelaram um efeito protetor do extrato aquoso de Achillea millefolium sobre a mucosa gástrica levando, entre outros efeitos a redução da atividade da enzima H+/K+ATPase. Os objetivos deste trabalho foram o estudo biodirigido quanto ao potencial de inibição da H+/K+ATPse frente a extratos hidroalcoólicos de Achillea millefolium L., e a avaliação do óleo essencial e abordagem fitoquímica quanto aos metabólitos secundários. A hidrodestilação do óleo essencial realizada em duas etapas, apresentou um óleo essencial de coloração azul escuro e forte odor característico, variando em concentração de 0,6 a 0,2 ml%. A análise do óleo por CG/MS, apresentou como componentes majoritários azuleno (10 %), 1,8-cineol (8,20 %) e cariofileno (8,0 %). A análise fitoquímica preliminar revelou a presença de esteróides e/ou triterpenos, taninos condesados e hidrolisáveis, flavonóides, ácidos fixos e aminogrupos. Com relação a atividade ATPásica, foram preparados três extratos hidroalcoólicos a 90 %, 70 % e 50 % em etanol, utilizando-se as partes aéreas isentas de inflorescência de Achillea millefolium. A atividade da enzima H+/K+ATPase foi testada na presença de cada extrato previamente seco e mantendo-se um grupo controle sem qualquer extrato. Dos extratos testados, o hidroalcoólico 70 % foi o mais ativo em reduzir a atividade da enzima, sendo escolhido para a continuação dos estudos. Após a realização de partição líquido/líquido com solventes de polaridade crescente, obteve-se 5 amostras diferentes, das quais a atividade enzimática diminuiu significativamente na presença da fração clorofórmica. A análise química dessa fração revelou ausência dos metabólitos anteriormente citados. Após a realização de hidrólise do material na presença de ácido sulfúrico, observou-se a presença de aminogrupos, sugerindo a presença de amidas na fração clorofórmica. PALAVRAS-CHAVE: Avaliação fitoquímica, óleo essencial, H+/K+ATPase, Achillea millefolium

Abstract: The specie Achillea millefolium L., is a plant that belongs to the family Asteraceae, native of Europe and Asia, having been introduced in America and acclimatized in Brazil. Difficulties to separate taxonomically the species of the genera, led to the creation of de Achillea millefolium group, where the different species present morphological, anatomic and genetic relationship, with number of chromosomes in multiple of nine. There are two subtypes of Achillea millefolium, varying in its genetic composition: one a triploid (2n=27) and other hexaploid (2n=54). This genetic variation is expressed in chemical composition of the essential oil, obtained by steam distillation, the first of light, and the second of dark blue coloration due to the presence of azulen. In folk medicine it is used to treat a large range of diseases, although just a small group of them are scientifically proved. Preview researches have shown the effect of aqueous extract of Achillea millefolium on the enzyme H+/K+ATPase activity reduction. The aim of this work were the evaluation of the hydroalcoholic extract of Achillea millefolium an the H+/K+ATPase activity. The extraction of the essential oil was accomplished in two stages, resulted in an essential oil of dark blue coloration and strong characteristic scent, varying concentration from 0,6 to 0,2 mL%. In analysis by CG/MS, it presented as majority components azulene (10 %), 1,8-cineol (8,20 %), caryophyllene (8,0 %). The preliminar phytochemical analysis revealed the presence of steroids and/or triterpenes, condensed and hydrolysable tannins, flavonoids fixed acids and aminogroups. In relation to the ATPasic activity, hydroalcoholic extracts were prepared at 90%, 70% and 50%, using aerial parts without inflorescence of Achillea millefolium. After previously dried and using a control group without extract, the hydroalcoholic extract at 70%, showed as more active and it was submitted liquid/liquid extration with solvents of growing polarity, from which 5 differentiated samples were obtained. All of them were tested against the enzyme and the chloroformic fraction showed the best activity. The chloroformic fraction did not show any of the previously metabolites. After hydrolysis with sulfuric acid, it was observed the presence of aminogroups, suggesting the presence of amide like compounds in this fraction. KEY-WORDS: Phytochemical evaluation, essential oil, H+/K+ATPase, Achillea millefolium