Doença do Caranguejo Letárgico : desvendando questoes etiológicas, epidemiológicas e de saúde pública

Abstract

Expressivas mortandades de Ucides cordatus, popularmente conhecido como caranguejo-uçá, têm sido registradas por catadores de caranguejos e biólogos ao longo da costa brasileira, principalmente na região nordeste. Por motivo dos sintomas característicos, a epizootia foi denominada Doença do Caranguejo Letárgico. Após diversas suspeitas, estudos preliminares identificaram uma levedura negra (Exophiala sp.) nas amostras teciduais de espécimes de U. cordatus moribundos, responsabilizando-a pelos eventos de mortandade. Assim, o objetivo desta dissertação foi buscar evidências, por meio de ensaios in vivo e in vitro, que suportem essa correlação. Investigou-se não apenas a patogenicidade de Exophiala sp., mas também sua possível dispersão marinha e inativação durante procedimento de cocção de animais enfermos. Testes de patogenicidade foram realizados com espécimes de U. cordatus sadios coletados no litoral paranaense (local não atingido pelas mortandades). Com exceção da morte de 1 animal inoculado com solução salina, os demais controles não apresentaram mortandade nos 30 dias dos experimentos. Entretanto, ao final deste período, os caranguejos pertencentes aos ensaios de infecção não-contínua e contínua inoculados com elementos miceliais e hifas de Exophiala sp. apresentaram, respectivamente, 60% e 50% (n=6 e n=5) de mortes, o que indica a notável patogenicidade deste agente. Os animais moribundos apresentaram comportamento semelhante àquele observado no ambiente em animais enfermos com DCL, incluindo letargia, tetania e ataxia. Análises histopatológicas dos principais tecidos afetados foram compatíveis a esses sinais clínicos. Posteriormente, a aplicação de marcadores moleculares confirmou a identidade de Exophiala sp. re-isolada dos animais infectados, satisfazendo assim os Postulados de Koch. Outros bioensaios avaliaram a presença de partículas virais no tecido de caranguejos-uçá moribundos em decorrência da DCL. Depois de macerados e filtrados, a solução resultante dessas amostras de tecido foi inoculada em caranguejos sadios. Após o término do experimento foram registradas mortes apenas nos grupos controle (n=4), corroborando assim, a etiologia fúngica dessa epizootia. Posteriormente, análises in vitro avaliaram os padrões de crescimento de UFCs de Exophiala sp. previamente expostas a várias salinidades em diferentes intervalos. A análise de variância de dois fatores (Intervalos de exposição x Salinidades) e o teste de Fisher, apontaram um significativo efeito negativo das salinidades no crescimento das colônias (p=0,044). Entretanto, a surpreendente reprodução dessa levedura negra durante o mais longo intervalo de exposição (1 semana) ( p<0,001), corrobora a hipótese de dispersão marinha baseada na distribuição dos eventos de mortandade de U. cordatus. Por fim, curtos intervalos de exposição (30 segundos) à elevada temperatura de cocção, mostraram-se eficientes na inativação de Exophiala sp. Confirmou-se, portanto, uma probabilidade quase nula de infecções cruzadas em humanos após ingestão de caranguejos-uçá moribundos previamente cozidos.

Massive mortalities of the mangrove land crab Ucides cordatus, regionally known as &quot;caranguejo-uçá", have been reported by crab-collectors and biologists along the Brazilian coast, mainly in Northeast region. Because of the symptoms depicted by the crabs, the epizootic was called Lethargic Crab Disease (LCD). After several suspected, preliminary analysis isolated a black yeast (Exophiala sp.) from tissue samples of specimens of moribund U. cordatus, blaming it by the mortality events. Thus, the aim of this dissertation was seek evidences, through in vivo and in vitro experiments, that support this correlation. Investigated not only the pathogenicity of Exophiala sp. but also its possible marine dispersion and inactivation during procedures of LCD animals cooking. The replicates of the tests of pathogenicity were performed with healthy specimens of U.cordatus collected on the coast Paraná state (local not reached by mortalities). Except for the death of 1 animal inoculated with saline, the other controls showed no mortalities within 30 days of experiments. However, the end of this period, the crabs belonging to these tests of infection noncontinuous and continuous inoculated with micelial elements and hyphae of Exophiala sp. had, respectively, 60% and 50% (n=6 and n=5) of deaths, which indicates a remarkable pathogenicity of this agent. Crabs dying showed behavior similar to that observed in the environment in animals with LCD, including lethargy, ataxy and tetany. Analyses of the major histopathological tissue affected were consistent with these clinical signs. Subsequently, the application of molecular markers confirmed the identity of Exophiala sp. re-isolated of infected animals, thereby fulfilling the Koch’s Postulates. Other tests evaluated the presence of viral particles in tissues of moribund U.cordatus due to the LCD. After macerated and filtered, the resulting solution of the samples of tissue were inoculated into healthy crabs. After the end of the experiment deaths were registered only in the control groups (n=4), thus corroborating, the fungal etiology of this disease. Later, in vitro analysis evaluated the patterns of CFUs growth of Exophiala sp. previously exposed to a wide range of salinities at different intervals. ANOVA &quot;Two-ways" (Intervals of exposure x Salinities) and the test of Fisher showed a significant negative effect of salinity on the growth of colonies (p=0,044). However, the surprising reproduction of that black yeast during the longer interval exposure (1 week) (p<0,001), corroborate the hypothesis of marine dispersion based on the distribution of the events of mortalities of U. cordatus. Finally, short intervals of exposure (30 seconds) to the high temperature of cooking, became effective in the inactivation of Exophiala sp. Thus, it was confirmed an almost zero possibility of cross infection in humans after ingestion of moribund crabs pre-cooked.