Caracterização molecular de biosorotipos selvagens de Streptococcus mutans isolados de crianças com diferentes históricos da doença cárie
Resumo
Resumo : Amostras de Streptococcus do grupo Mutans provenientes da saliva de crianças de baixa renda, com diferentes históricos da doença cárie foram isoladas em Agar Mitis Salivarius e purificadas, obtendo 44 isolados de S. mutans, caracterizados por meio de marcadores morfológicos e bioquímicos. O DNA genômico dos isolados foi extraído utilizando CTAB (Brometo de Cetiltrimetilamônio) associado a sonicação. A variabilidade genética dos isolados foi estudada por meio de marcadores RAPD utilizando os oligonucleotideos iniciadores OPA2, OPA3, OPA5, OPA8, OPA9 E OPA13. O software "NTSYS" foi utilizado para análise do polimorfismo usando o coeficiente de Jaccard e o método "UPGMA" para construção de dendrogramas. A consistência dos agrupamentos foi avaliada por boodstrap usando o "winboot" software. Os dados revelaram grande variabilidade entre os isolados de S. mutans, considerando-se sua procedência e dados clínicos em diferentes grupos de crianças. O sequenciamento da região intergênica 16S-23S e do gene que codifica Glicosiltransferase B (gtf-B) foi realizado com o objetivo de estabelecer um padrão molecular de diferenciação dos isolados com diferentes padrões de virulência. A análise molecular da região intergênica revelou similaridades entre os isolados seqüenciados, o que demonstra que todos devam pertencer a mesma espécie. Já a análise do gtf-B revelou cinco genótipos diferentes, quando comparados com seqüências publicadas do mesmo gene no "Genbank" indicando a existência de variedades dentro da espécie. Abstract : Samples from the Streptococcus group obtained from saliva of low income background children with different history of tooth decay, were isolated and purified in Agar Mitis Salivarius, in order to obtain 44 samples of S. mutans, which were characterized by using morphological and biochemical identification. The genomic DNA from the extracted by the method of CTAB (Cetil-methiltetra amonium), associated to the sonication, was analysed by the RAPD method using the primers OPA2, OPA3, OPA5, OPA8, OPA9 and OPA13. The software "NTSYS" was applied for polymorphism analysis, using the Jaccard coefficient and the "UPGMA" method for construction of dendograms. The consistency of different groups was evaluated by boodstrap using the "winboot" software. The data revealed a wide variability among the isolated of the Streptococcus mutans, considering their origin and the clinical data in various children’s group. The sequency of the intergenic region and the Glicosiltransferase B (gtf-B) was performed in order to establish a molecular pattern of the strain with different virulences. The molecular analysis of the intergenic region, revealed similarities among the isolated, which showed that they were from the same species. However the gtf-B analysis demonstrated five different genotypes when compared with sequencies from the "Genbank", pointing to the existence of variations into the same species.
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- Teses & Dissertações [10015]