Deficiencia auditiva não-sindromica : avaliação genética (genes de conexinas) e fenotípica (clínica e audiológica)

Abstract

A deficiência auditiva neurossensorial, não-sindrômica, autossômica recessiva, é a forma mais comum de perda auditiva de origem genética, sendo que as mutações no gene GJB2, que codifica a Conexina 26, representam sua causa mais comum (aproximadamente 50%). A mutação 35delG (deleção de uma guanina no nucleotídeo 35), tem sido encontrada com alta freqüência em muitos grupos étnicos, além de também ter sido observada em heterozigose, em 10 a 42% dos afetados. Uma das hipóteses inclui a possibilidade de uma herança digênica, com a atuação do gene GJB6, que codifica a Conexina 30. Neste estudo, foram verificadas a mutação 35delG (gene GJB2) e as deleções do gene GJB6, del(GJB6-D13S1830) e del(GJB6-D13S1854), em 156 portadores de perda auditiva neurossensorial bilateral, pré-lingual, não sindrômica, residentes na cidade de Curitiba (Sul do Brasil), selecionados de escolas para deficientes auditivos. A faixa etária dos participantes foi de 13 meses a 42 anos, sendo 56% do sexo masculino. O DNA foi extraído de sangue periférico e a genotipagem da mutação 35delG foi realizada após digestão do produto de PCR com a enzima MvaI, com subseqüente eletroforese em gel de acrilamida a 8%. A genotipagem para as duas deleções do gene GJB6 foi realizada por meio de uma PCR multiplex, com posterior eletroforese em gel de agarose a 2% corado com brometo de etídio. Em 144 deficientes auditivos não consangüíneos, a freqüência dos homozigotos para a mutação 35delG foi 20,14% . 3,34% e dos heterozigotos, foi 14,58% . 2,94%, sendo a freqüência do alelo 35delG estimada em 27,43% . 2,63%. Entre os 21 heterozigotos também examinados para as deleções do gene GJB6, dois são heterozigotos compostos, um para a deleção del(GJB6- D13S1830) e outro para a deleção del(GJB6-D13S1854), cada um com uma freqüência de 4,76% . 4,65%, neste grupo de heterozigotos. Para análise da relação entre genótipo e fenótipo, foram realizados os seguintes exames de avaliação audiológica: audiometria tonal liminar (ATL), imitanciometria, emissões otoacústicas transientes e por produto de distorção, e potencial evocado auditivo do tronco encefálico. Concordando com alguns dos estudos já publicados, esses dados não revelaram diferenças significativas da expressividade fenotípica entre os três genótipos referentes à mutação 35delG, considerando tanto o grau e a simetria da perda auditiva, bem como sua configuração. A perda auditiva de grau severo e profundo ocorreu em 88% ± 6% dos homozigotos e em 79% ± 11% dos heterozigotos. Correlação positiva significativa das médias de ATL (coeficiente de correlação = 79%) ocorreu entre os 8 pares de irmãos com deficiência auditiva, sugerindo a presença de genes modificadores, que tendem a levar a uma performance auditiva semelhante dentro das famílias.

The sensorineural, nonsyndromic, autosomic recessive hearing impairment is the most common form of deafness with genetic origin and the mutations of the GJB2 gene which encodes Connexin 26 represent its most frequent cause (about 50%). The 35delG mutation (deletion of a guanine at nucleotide 35) has been found with high frequency in many ethnic groups and has been observed in heterozygosis of as much as 10 to 42% of affected. One of the hypothesis claims a digenic inheritance with the interaction of the GJB6 gene, which encodes Connexin 30. In the present study, the 35delG mutation (GJB2 gene) and deletions of the GJB6 gene, del(GJB6-D13S1830) and del(GJB6-D13S1854) were examined for 156 carriers of sensorineural bilateral, prelingual, nonsyndromic hearing impairment, living in the city of Curitiba (South Brazil), ascertained from schools for people with hard hearing impairment. Age range of the individuals was from 13 months to 42 years, being 56% males. DNA was extracted from peripheral blood leukocytes and the genotyping of the 35delG mutation was carried after digestion of PCR product with the MvaI enzyme and subsequent electrophoresis on 8% polyacrylamide gel. Genotyping for the two GJB6 gene deletions was performed by multiplex PCR followed by electrophoresis on 2% agarose gel stained with ethidium bromide. Among the 144 non consanguineous individuals with hearing impairment, the frequency of homozygotes for the 35delG mutation was 20.14% . 3.34% and that of heterozygotes was 14.58% . 2.94%, being the frequency of the 35delG allele estimated as 27.43% . 2.63%. Two compound heterozygotes were found within the 21 heterozygotes that were also examined for the GJB6 gene deletions: one presented the del(GJB6-D13S1830) deletion and the other showed the del(GJB6- D13S1854) deletion, each one with a frequency of 4.76% . 4.65% in the heterozygote group for the 35delG mutation. The following evaluations were performed for posterior analysis of genotype-phenotype relation: pure tone audiometry (PTA), immitanciometry, evoked otoacoustic emissions both transient and by distorted product, and auditory brainstem evoked potential. In accordance with some of the literature data, these data did not reveal any significant difference on phenotypic expressivity when the three genotypes for the 35delG mutation were compared, considering the degree and symmetry of hearing impairment, as well as audiogram shape. Severe to profound hearing impairment appeared in 88% ± 6% of homozygotes and in 79% ± 11% of heterozygotes. Significant positive correlation of PTA means (correlation coefficient = 79%) occurred for the eight sib pairs with hearing impairment, suggesting the influence of modifying genes that tend to lead to similar hearing performance within families.