Identificação de Botrytis spp do morangueiro no estado do Paraná

Abstract

Resumo: O estado do Paraná é um dos maiores produtores brasileiros de morango, entretanto, um dos problemas que limita o cultivo de morango é a ocorrência de doenças em todos os estágios de desenvolvimento. Dentre essas doenças destacase o mofo cinzento causado por Botrytis cinerea. Esta espécie é a única relatada no Brasil em morango, entretanto por possuir alta variabilidade entre os isolados, novos estudos devem ser conduzidos para identificar as espécies que ocorrem no estado do Paraná. O controle químico é o método mais utilizado para o controle da doença. Não há estudos sobre sensibilidade de B. cinerea a fungicidas e sobre identificação de espécies de Botrytis que infectam morango no Paraná. Dessa forma há necessidade de identificação dos isolados a nível de espécie e avaliação da sensibilidade . Dessa forma, os objetivos deste trabalho foram investigar as possíveis espécies causadoras de mofo cinzento no morango no Paraná e estudar sua sensibilidade aos fungicidas: procimidona (P), iprodiona (I), boscalida (B), tiofanato metílico (T), fluazinam (F), azoxistrobina (A) e difenoconazol (D). A identificação de 150 isolados de Botrytis sp. foi realizada por meio da amplificação do DNA por PCR, utilizando iniciadores específicos. A sensibilidade aos fungicidas foi determinada com ensaios in vitro por doses discriminatórias e CE50 (concentração efetiva para inibir 50% do crescimento do fungo) e ex vivo (eficácia de controle da doença). Fenótipos foram determinados a partir de combinações (S- sensível e Rresistente) entre os fungicidas testados. Foram selecionados 30 isolados com base no fenótipo para estudo da CE50 que foi estimada a partir da regressão linear entre a porcentagem de inibição do crescimento micelial e do respectivo log10 das concentrações do fungicida. Para verificar o controle da doença, frutos tratados com os fungicidas (P), (B), (T), (F), (A), e (D) foram inoculados com dois isolados com diferentes fenótipos. Neste ensaio foram avaliados o período de incubação, período de latência, incidência final e área abaixo da curva de progresso da incidência(AACPD). Não foram identificadas novas espécies, todos os isolados foram confirmados como Botrytis cinerea. Foram identificados 41 fenótipos de sensibilidade a fungicidas e destes, seis apresentaram resistência aos sete fungicidas testados. A percentagem de isolados resistentes foi de 45,3; 43,3; 44,0; 90,0; 32,7 e 33,3% para os fungicidas boscalida, iprodiona, procimidona, azoxistrobina, fluzinam e difenoconazol, respectivamente. A frequência de isolados altamente resistentes ao tiofanato metílico foi de 94,6%. A CE50 para os fungicidas procimidona, fluazinam e boscalida variou de valores inferiores a 0,1 até superiores a 100 yg/ml. Para azoxistrobina a maioria dos isolados apresentou CE50 superior a 100 yg/ml. Os ensaios ex vivo mostraram que o fluazinam é o fungicida que proporciona melhor controle.

Abstract: The state of Paraná is one of the largest Brazilian strawberry producers. However, the appearance of diseases at all stages of development limits strawberry cultivation. Among these diseases, the gray mold caused by Botrytis cinerea stands out. This species is the only one reported in Brazil in strawberry. However, because of the high variability among the isolates, new studies should be conducted to identify the species that occur in the state of Paraná. Chemical control is the most commonly used method for disease management. There are no studies on the sensitivity of B. cinerea to fungicides and on the identification of Botrytis species that infect strawberries in Paraná. Therefore, identification of isolates at the species level and sensitivity assessments should be performed. The objective of this work was to investigate the species causing gray mold in strawberry in Paraná and to study its sensitivity to fungicides: procymidone (P), iprodione (I), boscalid (B), thiophanatemethyl (T), fluazinam (F), azoxystrobin (A) and difenoconazole (D). The identification of 150 isolates of Botrytis sp. was performed by DNA amplification by PCR, using specific primers. Sensitivity to fungicides was determined in vitro by discriminatory doses and EC50 (effective concentration to inhibit 50% fungus growth) and ex vivo (disease control efficacy). Phenotypes were determined from combinations (Ssensitive and R-resistant) among the fungicides tested. We selected 30 phenotypebased isolates for the EC50 study that was estimated from the linear regression between the percentage inhibition of mycelial growth and the respective log10 of fungicide concentrations. To verify the control of the disease, fruits treated with fungicides (P), (B), (T), (F), (A), and (D) were inoculated with two isolates with different phenotypes. In this trial, the incubation period, latency period, final incidence and area under the disease progress curve (AUDPC) were evaluated. No new species were identified, all isolates being confirmed as Botrytis cinerea. A total of 41 fungicide sensitivity phenotypes were identified and six were resistant to all seven fungicides tested. The percentage of resistant was 45.3; 43.3; 44.0; 90.0; 32.7 and 33.3% for the fungicides boscalide, iprodione, procymidone, azoxystrobin, fluzinam and difenoconazole, respectively. The frequency of highly resistant isolates to thiophanate-methyl was 94.6%. The EC50 for the fungicides procymidone, fluazinam and boscalid ranged from values less than 0.1 to higher than 100 yg/ml. For azoxystrobin most of the isolates had EC50 higher than 100 yg/ml. Ex vivo assays have shown that fluazinam is the fungicide that provides better control.