https://hdl.handle.net/1884/65682 Wed, 15 Apr 2026 09:22:56 GMT 2026-04-15T09:22:56Z https://hdl.handle.net/1884/82333 Atividade antimicrobiana e compostos bioativos dos extratos liofilizados do cogumelo gigante Macrocybe titans (H.E Bigelow & Kimbr) Resumo: Os fungos são conhecidos como produtores de muitos compostos químicos bioativos, sintetizados em diferentes fases de seus ciclos de vida. Os basidiomicetos são consumidos rotineiramente como alimentos nutracêuticos em muitas culturas orientais. Os compostos bioativos são produzidos tanto nos basidiomas, quanto no micélio vegetativo destes organismos. O objetivo principal desse trabalho foi investigar a ação antibacteriana de diferentes extratos obtidos a partir dos basidiomas de Macrocybe titans, e a caracterização química dos compostos fenólicos. Quatro metodologias de extração foram realizadas a partir da biomassa seca do isolado de M. titans denominado MT31: Banho de ultrassom, Ponteira ultrassônica, Extração com agitação em Shaker e Extração estática a frio. Os extratos liofilizados foram submetidos à testes de atividade biológica contra as bactérias Staphylococcus aureus, Listeria monocytogenes, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa e Klebsiella pneumoniae. Os melhores resultados de inibição bacteriana obtidos pelo teste de disco-difusão foram observados contra S. aureus e K. pneumoniae, com tamanho médio de halo de inibição de 27,8 e 23,1 mm, respectivamente. As análises de Concentração Inibitória Mínima (CIM) e Concentração Bactericida Mínima (CBM) demonstram uma marcante atividade antimicrobiana para todos os extratos testados. S. aureus foi a bactéria mais suscetível à ação do extrato com a CIM de 0,99 mg/mL. Através da (CBM) foi possível confirmar também a atividade bactericida mínima dos extratos em relação às cepas bacterianas testadas. Foram realizadas análises de determinação de fenólicos totais, flavonoides e Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) de todos os extratos. Os extratos denominados AgBu (10,6 mg/g) e ActPu (2,9 mg/g) apresentaram elevada taxa de compostos fenólicos e flavonoides respectivamente. Os resultados das análises por CLAE demonstram que o isolado MT31 produz compostos que podem estar relacionados com a inibição do crescimento e desenvolvimento das bactérias. Foram identificados e quantificados oito compostos fenólicos, sendo o mais predominante em todos os extratos o ácido clorogênico variando de 0,9302 a 0,4775 mg/g, para ActBu e AgSK, respectivamente. Adicionalmente, realizou-se ensaios de padronização de condições de amplificação do material genético, e testes de anelamento de primers para a avaliação preliminar da ativação da expressão de genes relacionados com a produção de Peptídeos Antimicrobianos (PAMs) pela técnica de RT-qPCR, embora ainda preliminares, demonstraram um sinal tardio de amplificação para o gene DLP2 (defensin-like protein) em micélio desafiado com S. aureus, quando comparado com a amostra controle.; Abstract: Fungi are known to produce many bioactive chemical compounds, synthesized at different stages of their life cycles. Basidiomycetes are routinely consumed as nutraceutical foods in many eastern cultures. Bioactive compounds are produced both in the basidiomes and in the vegetative mycelium of these organisms. Bioactive compounds are produced both in the basidiomes and in the vegetative mycelium of these organisms. The main objective of this work was to investigate the antibacterial action of different extracts obtained from the Macrocybe titans basidiomes, and the chemical characterization of the phenolic compounds. Four extraction methodologies were performed from the dry biomass of the M. titans isolate called MT31: Ultrasonic bath, Ultrasonic tip, Extraction with shaking in Shaker, and Cold static extraction. The lyophilized extracts were submitted to tests of biological activity against the bacteria Staphylococcus aureus, Listeria monocytogenes, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, and Klebsiella pneumoniae. The best bacterial inhibition results obtained by the disk-diffusion test were observed against S. aureus and K. pneumoniae, with an average size of the inhibition halo of 27.8 and 23.1 mm, respectively. The Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and Minimum Bactericidal Concentration (MBC) analyses demonstrate a marked antimicrobial activity for all tested extracts. S. aureus was the bacteria most susceptible to the action of the extract with a MIC of 0.99 mg/mL. Through (MBC) it was also possible to confirm the minimum bactericidal activity of the extracts to the bacterial strains tested. Analyzes were performed to determine the total phenolics, flavonoids, and High-Performance Liquid Chromatography (HPLC) of all extracts. The extracts called AgBu (10.6 mg/g) and ActPu (2.9 mg/g) showed a high rate of phenolic compounds and flavonoids, respectively. The results of HPLC analyses demonstrate that the MT31 isolate produces compounds that may be related to the inhibition of bacterial growth and development. Eight phenolic compounds were identified and quantified, the most prominent in all extracts being chlorogenic acid ranging from 0.9302 to 0.4775 mg/g for ActBu and AgSK, respectively. Additionally, tests were carried out to standardize conditions for amplification of the genetic material, and primer annealing tests for the preliminary evaluation of the activation of the expression of genes related to the production of Antimicrobial Peptides (AMPs) by the RT-qPCR technique, although still preliminary, demonstrated a late amplification signal for the DLP2 gene (defensin-like protein) in mycelium challenged with S. aureus, when compared with the control sample. Orientador: Prof. Dr. Fábio Rogério Rosado; Coorientador: Prof. Dra. Adriana Fiorini Rosado; Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor Palotina, Programa de Pós-Graduação Multicêntrico em Bioquímica e Biologia Molecular. Defesa : Palotina, 09/12/2022; Inclui referências: p. 77-84 Sat, 01 Jan 2022 00:00:00 GMT https://hdl.handle.net/1884/82333 2022-01-01T00:00:00Z https://hdl.handle.net/1884/84863 Expressão gênica de peptídeos antimicrobianos de Macrobrachium rosenbergii (De Man, 1879) submetidoa desafio séptico com Aeromonas hydrophila Resumo: A aquicultura vem ganhando destaque no cenário atual. A produção de camarão, principalmente de água doce, são atividades em expansão devido ao importante valor econômico. A espécie Macrobrachium rosenbergii (De Man 1879), conhecido como camarão gigante de água doce, destaca-se por ser um dos crustáceos mais importantes economicamente por possuir elevado valor de mercado, e dessa forma, é produzido em larga escala em diferentes partes do mundo. Em seu ambiente de produção, o camarão está exposto a uma infinidade de microrganismos benéficos ou patógenos que podem onerar os sistemas de produção fazendo com que a cultura do camarão esteja ameaçada. Pequenas cadeias de aminoácidos denominados de peptídeos antimicrobianos (PAMs) são secretados e reagem de forma ativa no combate a infecções adversas e são eficientes na eliminação dos patógenos. O hepatopâncreas é um órgão essencial presente nos invertebrados, considerado como fonte de moléculas imunes. Este trabalho teve como objetivo avaliar e comparar a expressão de genes para PAMs, no hepatopâncreas de camarões adultos de M. rosenbergii em resposta a injúria séptica com a bactéria Aeromonas hydrophila nos tempos de 0, 12 e 24 horas após inoculação. Os experimentos foram realizados na Universidade Federal do Paraná (UFPR - Setor Palotina). Os animais foram avaliados quanto ao tempo de coagulação da hemolinfa como parâmetro para avaliar a sanidade dos animais utilizados nos experimentos. A bactéria A. hydrophila foi avaliado por testes bioquímicos e morfológicos, sendo caracterizada como A. hydrophila com teste negativo para indol. Nas análises moleculares, o perfil transcricional de genes relacionados com os PAMs foram analisados através da técnica de RT-PCR quantitativa e semiquantitativa e as proteínas do órgão foram extraídas e visualizadas em gel de poliacrilamida. O gene da ?-actina, utilizado como normalizador da expressão gênica demonstrou estar presente em todas as condições testadas. Os resultados indicaram que os genes, Pellino-1 e ALF-6 foram expressos em maior quantidade com 12 horas após desafio séptico com a bactéria, enquanto para Crustina na presença da bactéria, houve a repressão do gene (tempo 12 e 24 horas após inoculação). O gene ALF-6 apresentou uma super expressão com fold change de 17x, apontando um papel específico no combate a infecção causada por A. hidrophila. Portanto, foi possível observar em nosso trabalho que o hepatopâncreas foi capaz de expressar os PAMs aqui estudados, regulando a expressão dos genes nos diferentes tempos avaliados para os animais desafiados, como esperado, validando a presença de um sistema imunológico respondendo a infecções por organismos patogênicos, como a A. hydrophila. Faz-se necessários estudos complementares através de técnicas bioquímicas mais sofisticadas, para que a imunologia de M. rosenbergii possa ser mais bem compreendida.; Abstract: Aquaculture has been gaining prominence in the current scenario. Shrimp production, mainly freshwater, is an expanding activity due to its important economic value. The species Macrobrachium rosenbergii (De Man 1879), known as giant freshwater shrimp, stands out for being one of the most economically important crustaceans for having a high market value, and therefore, it is cultivated on a large scale in different parts of the world. In their production environment, shrimp are exposed to a multitude of beneficial microorganisms or pathogens that can burden production systems, making shrimp culture endangered. Small chains of amino acids called antimicrobial peptides (AMPs) are secreted and react actively to combat adverse infections and are efficient in eliminating pathogens. The hepatopancreas is an essential organ present in invertebrates, considered as a source of immune molecules. This work aimed to evaluate and compare the expression of genes for AMPs in the hepatopancreas of adult M. rosenbergii shrimp in response to septic injury with the bacterium Aeromonas hydrophila at 0, 12 and 24 hours after inoculation. The experiments were carried out at the Universidade Federal do Paraná (UFPR - Setor Palotina). The animals were evaluated regarding the hemolymph clotting time as a parameter to assess the health of the animals used in the experiments. The bacterium A. hydrophila was evaluated by biochemical and morphological tests, being characterized as A. hydrophila with negative test for indole. In the molecular analyses, the transcriptional profile of genes related to the AMPs were analyzed using the quantitative and semi-quantitative RT-PCR technique and the organ proteins were extracted and visualized on a polyacrylamide gel. The ?-actin gene, used as a gene expression normalizer, proved to be present in all conditions tested. The results indicated that the genes Pellino-1 and ALF-6 were expressed in greater quantity 12 hours after septic challenge with the bacteria, while for Crustina in the presence of the bacteria, there was gene repression (time 12 and 24 hours after inoculation). The ALF-6 gene showed an overexpression with a fold change of 17x, pointing to a specific role in combating the infection caused by A. hydrophila. Therefore, it was possible to observe in our work that the hepatopancreas was able to express the AMPs studied here, regulating gene expression at different times evaluated for the challenged animals, as expected, validating the presence of an immune system responding to infections by pathogenic organisms, such as A. hydrophila. Complementary studies are necessary through more sophisticated biochemical techniques, so that the immunology of M. rosenbergii can be better understood. Orientador: Prof. Dr. Fabio Rogério Rosado; Coorientador: Prof. Dr. Flavio Augusto Vicente Seixas; Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor Palotina, Programa de Pós-Graduação em Multicêntrico em Bioquímica e Biologia Molecular. Defesa : Palotina, 28/07/2023; Inclui referências: p. 79-90; Área de concentração: Bioquímica e Biologia Molecular Sun, 01 Jan 2023 00:00:00 GMT https://hdl.handle.net/1884/84863 2023-01-01T00:00:00Z https://hdl.handle.net/1884/73250 Cultivo de trigo (Triticum aestivum var. Lini) in vitro na ausência de nitrogênio e presença de Herbaspirillum seropedicae : uma abordagem proteômica Chagas, Adeline Neiverth Resumo: O nitrogênio (N) é o principal determinante da produtividade para a cultura do trigo, sendo esse um dos maiores desafios da agricultura. O trigo está entre os cereais mais consumidos no mundo e sua produção no Brasil não atende a demanda nacional. A inoculação com bactérias promotoras de crescimento vegetal pode ser considerada uma ferramenta promissora na busca de uma agricultura sustentável e na diminuição de custos. Assim sendo, o objetivo deste estudo foi investigar proteínas presentes nas folhas de trigo das cultivares CD104 e CD120 quando inoculadas com a bactéria Herbaspirillum seropedicae para compreender a fisiologia da planta e do sistema fotossintético na ausência desse nutriente essencial ao seu desenvolvimento. Para obter as plantas em experimentos in vitro, sementes de trigo foram esterilizadas, pre-germinadas e transferidas para tubos de ensaio de vidro contendo meios de cultivo. Os controles experimentais, sem inóculo da bactéria, foram obtidos de plantas cultivadas no meio MS líquido sem (SN) e com (CN) fonte de nitrogênio. Após 24h, alguns tubos com meio SN receberam inóculo da bactéria (SNI) e todos os tubos foram mantidos em sala de cultivo a 24 °C e foto-período de 14 h de luz por 20 dias. Nenhum meio de cultura continha sacarose. As folhas foram tomadas para avaliar a massa seca e fresca, comprimento e produção de extrato de proteínas para realização de análise proteômica com base no fracionamento de proteínas por SDS-PAGE seguida de LC-MS/MS, tipo Q-TOF. Plantas intactas foram usadas para obtenção de índice de nitrogênio (NBI), clorofila (CHL), flavonoides, antocianinas e fluorescência da clorofila. As proteínas identificadas foram divididas de acordo com função em componentes celulares, processos biológicos e funções moleculares. A partir dos resultados, foi possível observar para as folhas da cv. CD120 que a bactéria promoveu incremento de NBI e CHL, e reduziu antocianinas. Houve também redução na extinção fotoquímica e não-fotoquímica a partir dos dados de fluorescência da clorofila. E apenas uma proteína foi identificada exclusivamente no tratamento SNI, sendo atribuída à proteção do fotossistema II (PSII). Enquanto as folhas da cv. CD104 obtidas do meio SNI, 5 proteínas foram relacionadas a fotossíntese e outras proteínas sugerem relação com respostas de hipersensibilidade e resistência a doenças em plantas, como a beta-1,3-glucanase. Ambas as cultivares, na ausência de nitrogênio (SN), apresentaram proteínas relacionadas ao metabolismo antioxidante, dentre elas a glutationa S-transferase. Os resultados sugerem que a ausência de nitrogênio é promotora de estresse nas plantas de trigo de ambas cultivares, porém a cv. CD120 é mais tolerante. É possível concluir que a interação com a bactéria H. seropedicae é genótipo dependente e que a presença da bactéria no meio induziu nas plantas diferentes respostas para mitigação do estresse da ausência de nitrogênio, sendo que para a cv. CD104 promoveu tolerância e a cv. CD120 obteve nitrogênio pela interação com a bactéria.; Abstract: Nitrogen (N) is the main determinant of wheat crop productivity, which is one of the biggest challenges in agriculture. Wheat is the most consumed cereal in the world and its production is not enough to meet consumption in Brazil. Inoculation with plant growthpromoting bacteria can be a promising tool in the search for sustainable agriculture and cost reduction. Therefore, the objective of this study was to investigate proteins present in the wheat leaves of cultivars CD104 and CD120 when inoculated with a diazotrophic bacteria Herbaspirillu seropedicae to understand the plant and photosynthetic system physiology in the absence of this essential nutrient for its development. To obtain the plants in vitro experiments, wheat seeds were sterilized, pre-germinated and transferred to glass test tubes containing medium. The experimental controls, without bacterial inoculum, were obtained from plants grown in MS liquid medium without (SN) and with (CN) nitrogen source. After 24h, some tubes of SN medium received bacterial inoculum (SNI) and all tubes were kept in a culture room at 24 °C and a 14-hour photoperiod of light for 20 days. Sucrose was not added to mediuns. Leaves were harvested to evaluate dry and fresh mass, length, and production of protein extract for proteomics based on protein fractionation by SDS-PAGE followed by LCMS / MS, type Q-TOF. Intact plants were used to obtain nitrogen index (NBI) and chlorophyll (CHL), flavonoids and anthocyanins, chlorophyll fluorescence. The identified proteins were distributed in different cellular components, biological processes, and molecular functions. From the results it was possible to observe the bacterium promoted the increase of NBI and CHL, reduced anthocyanins in leaves of cv. CD120 and the chlorophyll fluorescence data shown reduction in photochemical and non-photochemical extinction too. Only one protein was uniquely at this condition and it is attributed to protection of photosystem II (PSII). While the leaves of cv. CD104 from the SNI medium were observed 5 proteins related to photosynthesis and other proteins to hypersensitivity and diseases resistance responses, such as beta-1,3- glucanase. Both cultivars in the absence of nitrogen (SN) presented proteins related to antioxidant metabolism, among them glutathione S-transferase, although chlorophyll fluorescence data were not severely affected, proteomic data indicated cv. CD120 is more tolerant to nitrogen absence. It is possible to conclude interaction with the bacterium H. seropedicae is plant-genotype dependent and the presence of the bacteria is inducing different responses to mitigate plant stress in the medium without nintrogen source.There is evidence to conclude that cv. CD104 is achiving tolerance and cv. CD120 is obtaining nitrogen from interaction with the bacterium. Orientadora: Profa. Dra. Marise Fonseca dos Santos; Coorientador: Profa. Dra. Adriana Silva Hemerly; Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor Palotina, Programa de Pós-Graduação Multicêntrico em Bioquímica e Biologia Molecular. Defesa : Curitiba, 30/10/2020; Inclui referências: p. 103-125 Fri, 01 Jan 2021 00:00:00 GMT https://hdl.handle.net/1884/73250 2021-01-01T00:00:00Z