https://hdl.handle.net/1884/39618 Fri, 03 Jul 2026 01:01:15 GMT 2026-07-03T01:01:15Z https://hdl.handle.net/1884/105781 Avaliação do potencial imunomodulador de uma ß-galactana isolada dos frutos de Sicana odorifera, Cucurbitaceae Resumo: Polissacarídeos isolados de diferentes partes de plantas apresentam grande potencial de aplicação biológica, por exibirem baixa toxicidade. Diversas partes da planta da espécie Sicana odorifera são comumente utilizadas para fins medicinais. Recentemente, foi isolada uma ß-D (1->4)-galactana dos frutos de S. odorifera e no presente estudo os efeitos deste polissacarídeo em macrófagos peritoneais de camundongos foram investigados. Para isto, os macrófagos foram isolados, plaqueados e incubados com o ou sem polissacarídeo, por 6, 24 e 48 horas. Inicialmente foram avaliados quanto a viabilidade celular pelo método de metil- tetrazólio (MTT). Posteriormente, analisou-se as alterações na morfologia por microscopia optica, a atividade fagocítica pela fagocitose de S. cerevisae, a produção de ânion superóxido pelo método de nitroblue tetrazolium (NBT), a produção de óxido nítrico pelo método de Griess e a dosagem de interleucinas1 beta e 10 (IL-1ß e IL-10) e fator de necrose tumoral alfa (TNF-a) pelo método de ELISA. Os resultados mostram que em 24h de incubação 100 µg/mL da ß-D galactana diminuiu a viabilidade dos macrófagos em cerca de 20%. Ao contrário, em 48h houve aumento na viabilidade de 25% e 32% nas concentrações de 50 µg/mL e 100 µg/mL, respectivamente. Os grupos tratados com 50 µg/mL e 100 µg/mL do polissacarídeo promoveram diminuição de 47% e 67%, respectivamente, no número de macrófagos com perfil morfológico de ativação. A atividade fagocítica avaliada pela fagocitose de leveduras, após 48h de tratamento dos macrófagos com a ß-D galactana foi reduzida em ~ 50% com 50µg/mL, em relação ao grupo não tratado. Na presença de LPS (100 ng/mL) e a ß-D galactana a diminuição da atividade fagocítica foi de 40% e 33%, com 50 µg/mL e 100 µg/mL, respectivamente, em relação ao grupo tratado somente com LPS. A ß-D galactana não interferiu na produção de ânion superóxido pelos macrófagos em 1h de incubação. Por outro lado, a incubação na presença de LPS (100 ng/mL) e a ß-D galactana (50 µg/mL e 100 µg/mL), em ambas as concentrações houve redução de 70% na produção de ânion superóxido, comparado aos macrófagos tratados somente com o LPS. Em relação a produção de óxido nitrico em 48h, somente no tratamento simultâneo dos macrófagos com LPS 100 ng/mL juntamente com 50 µg/mL da ß-D galactana foi observado redução (19%) na produção deste mediador, em relação ao grupo tratado somente com LPS. Para as citocinas pró-inflamatórias avaliadas, em 6h de incubação 50 µg/mL da ß-D galactana aumentou em 100% a produção de TNF-a pelos macrófagos, em relação ao grupo não tratado, enquanto que 100 µg/mL do polímero não interferiu de forma significativa na produção desta interleucina. Macrófagos incubados durante 48h com 100 µg/mL da ß-D galactana reduziram em 95% na produção de IL-1ß, comparado ao controle sem tratamento. Em relação a produção de IL-10, uma citocina anti-inflamatória, 100 µg/mL da ß-D galactana promoveu aumento de 57%, em comparação aos macrófagos sem tratamento. Em conjuntos os resultados deste estudo demonstraram que a ß-D(1->4)-galactana de S. odorifera possui perfil imunossupressor; Abstract: Polysaccharides isolated from different plants show great potential of biological application, due their low toxicity. The Sicana odorifera specie is commonly used for medicinal purposes. Recently was isolated a ß-D(1->4)-galactan from fruit of S. odorifera and, in this present study the effects of this polysaccharide on mice peritoneal macrophages were investigated. To this, the macrophages were isolated, plated and incubated with or without the polysaccharide during 6, 24 and 48 hours. Initialy were evaluated for viability by the MTT method. Subsequently were evaluated the morphology changes by optical microscopy, the phagocytosis activity assessed by S. cerevisae , the production of superoxide anion by nitro blue tetrazolium (NBT) method, the production of nitric oxide by Griess method and dosage interleukin 1ß and 10 (IL-1ß and IL-10) and, tumor necrosis factor alpha (TNF-a) and by ELISA. The results show that in 24h of incubation 100 µg/mL of ß-D galactan diminished the cell viability of macrophages at 20%. In contrast, an increase of 25% and 32% with 50 µg/mL and 100 µg/mL, respectively in 48h, when compared with untreated group, was observed. The treated groups with 50 µg/mL and 100 µg/mL of the polysaccharide promoted decreasing of 47% and 67%, respectively, in the macrophages number with morphologic caracteristics of activation. The phagocytic activity after 48h of treatment of macrophages with the ß-D galactan was reduced in 50% with 50 µg/mL, in relation the untreated group. In the presence of LPS (100 ng/mL) and ß-D galactan the reducing in this parameter was of 40% and 33%, with 50 µg/mL and 100 µg/mL, respectively, in comparison with the treated group with only LPS. The ß-D galactan did not interfer in the superoxide anion production by macrophages for 1h of incubation. On the other hand, in the presence of LPS (100 ng/mL) and ß-D galactan (50 µg/mL and 100 µg/mL), for both concentrations the superoxide anion production was reduced at 70%, in comparison to macrophages in the presence only LPS. Regarding the production of nitric oxide for 48h, only in the treatment of macrophages with LPS 100 ng/mL plus 50 µg/mL of ß-D galactan was observed reduction of 20% in the level this mediator, in relation to the group treated with LPS. To the pro-inflammatory interleukins measured, in 6h of incubation 50 µg/mL of ß-D galactan increased at 100% the production of TNF-a by macrophages, in comparison to untreated group, while 100 µg/mL of the polymer did not interfer significantly in this interleukin production. Macrophages incubated during 48h with ß-D galactan (100 µg/mL) reduced at 95% the production of IL-1ß, compared with untreated cells. Concerning to IL-10 production, an anti- inflammatory interleukin, 100 µg/mL of ß-D galactan promoted an increasing of 57%, in comparison to control without treatment. Taken together, the results of this study show that the ß-D (1->4)-galactan of S. odorifera trigger an immunossupressor profile Orientadora: Prof.ª Dr.ª Guilhermina Rodrigues Noleto; Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ciências (Bioquímica). Defesa: Curitiba, 29/09/2015; Inclui referências Thu, 01 Jan 2015 00:00:00 GMT https://hdl.handle.net/1884/105781 2015-01-01T00:00:00Z https://hdl.handle.net/1884/100331 O efeito crabtree em celulas Hela : papel da Piruvato Quinase Resumo: Estudou-se o EFEITO CRABTREE em células HeLa utilizando-as intactas ou permeabilizadas com digitonina e em sistemas reconstituídos de mitocôndrias isoladas de fígado de rato e fração solúvel de células HeLa. Verificou-se em células permeabilizadas que a inibição do consumo de oxigênio é provocada por vários intermediários fosforilados da via glicolítica. Nesta situação o E. C. foi particularmente significativo quando se usou o PEP, indicando a participação da piruvato quinase na determinação dessa característica metabólica. Demonstrou-se ainda que o E. C. é parcialmente revertido por ATP e ADP na ordem direta do aumento de suas concentrações. Os experimentos realizados em sistema reconstituído permitiram avaliar que o PEP não opera no sentido de promover algum dano à mitocôndria, antes ao contrário reforçaram a proposta de que o EFEITO CRABTREE seja decorrente de uma competição entre essa organela e a piruvato quinase pelo ADP disponível. A alta atividade encontrada para a enzima isolada de extrato livre de células HeLa sustenta esta proposição Orientadores: Maria Benigna Martinelli de Oliveira; Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Ciências (Bioquímica) Fri, 01 Jan 1993 00:00:00 GMT https://hdl.handle.net/1884/100331 1993-01-01T00:00:00Z https://hdl.handle.net/1884/101901 Efeito de solventes eutéticos profundos na síntese enzimática de ésteres de açúcar Resumo: O processo enzimático para a síntese de ésteres de açúcar, compostos de grandeinteresse industrial, apresenta várias vantagens. As enzimas são regiosseletivas, o quepermite a produção do produto desejado em uma única etapa de reação, algo que nãoocorre no processo químico convencional. Além disso, por ser um processo de síntese, areação deve ocorrer em meios reacionais não aquosos, tipicamente utilizando solventesorgânicos. No entanto, devido à toxicidade associada aos solventes orgânicos, foramproduzidos solventes ambientalmente amigáveis, como os solventes eutéticos profundos(DESs), que têm mostrado resultados promissores na síntese de ésteres. Neste trabalho,foi realizada a acetilação da D-glucose com acetato de vinila, em uma reação catalisadapela Lipase B de Candida antarctica (CALB) e pelo sólido fermentado contendo lipasesde Burkholderia contaminans LTEB11. O produto principal da reação foi o a-D-6-Oacetilglucopiranosídeo,que foi purificado por cromatografia flash, identificado por RMNe IR, e quantificado por HPLC. A síntese do produto de interesse foi conduzida em meiocontendo DESs, preparados a partir de uma mistura de cloreto de colina e glucose(ChCl:Glu 1:1) e cloreto de colina e glicerol (ChCl:Gli 1:2). Para fins de comparação, asíntese também foi realizada em um sistema livre de solvente, utilizando como substratometil-a-D-glucose em acetato de vinila puro. Os resultados mostraram que a síntese demetil-a-D-6-O-acetilglucopiranosídeo no sistema livre de solvente obteve umdesempenho de 82% de conversão, comparado com o sistema DES (ChCl:Glu), quealcançou 44% de conversão do éster de açúcar após 72 h de reação. A baixa conversão nosistema ChCl:Glu pode ser atribuída à alta viscosidade do DES. Com isso, foi avaliada aadição de diferentes concentrações de água (10%, 20% e 30% v v-1) como co-solventejunto ao ChCl:Glu. A mistura contendo 20% de água apresentou um maior resultado, com91% de conversão após 72 h de reação, comparado a conversão obtida no sistema semágua (44%). Porém, a concentração mais alta de água (30%) causou uma queda naconversão para 72%. Os resultados indicam que a adição de DES e água proporciona umambiente mais adequado para as reações enzimáticas, diminuindo a viscosidade do meioe melhorando a solvatação da enzima.; Abstract: The enzymatic process for the synthesis of sugar esters, compounds of great industrialinterest, presents several advantages. Enzymes are regioselective, allowing the productionof the desired product in a single reaction step, which does not occur in the conventionalchemical process. Additionally, since it is a synthesis process, the reaction must occur innon-aqueous reaction media, typically using organic solvents. However, due to thetoxicity associated with organic solvents, environmentally friendly solvents, such as deepeutectic solvents (DESs), have been developed and have shown promising results in thesynthesis of esters. In this work, the acetylation of D-glucose with vinyl acetate wascarried out in a reaction catalyzed by Lipase B from Candida antarctica (CALB) and bythe fermented solid containing lipases from Burkholderia contaminans LTEB11. Themain product of the reaction was a-D-6-O-acetylglucopyranoside, which was purified byflash chromatography, identified by NMR and IR, and quantified by HPLC. The synthesisof the product of interest was conducted in a medium containing DESs, prepared from amixture of choline chloride and glucose (ChCl:Glu 1:1) and choline chloride and glycerol(ChCl:Gli 1:2). For comparison purposes, the synthesis was also performed in a solventfreesystem, using methyl-a-D-glucose as a substrate in pure vinyl acetate. The resultsshowed that the synthesis of methyl-a-D-6-O-acetylglucopyranoside in the solvent-freesystem achieved a conversion of 82%, compared to the DES (ChCl:Glu) system, whichreached 44% conversion of the sugar ester after 72 h of reaction. The low conversion inthe ChCl:Glu system can be attributed to the high viscosity of the DES. Therefore, theaddition of different concentrations of water (10%, 20%, and 30% v v-1) as a co-solventalong with ChCl:Glu was evaluated. The mixture containing 20% water showed the bestresult, with 91% conversion after 72 h of reaction, compared to the conversion obtainedin the water-free system (44%). However, the highest water concentration (30%) causeda decrease in conversion to 72%. The results indicate that the addition of DES and waterprovides a more suitable environment for enzymatic reactions by reducing the viscosityof the medium and improving enzyme solvation. Orientadora: Profa. Dra. Nadia Krieger; Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Bioquimica. Defesa : Curitiba, 24/03/2025; Inclui referências Wed, 01 Jan 2025 00:00:00 GMT https://hdl.handle.net/1884/101901 2025-01-01T00:00:00Z https://hdl.handle.net/1884/101812 A toxicidade dos derivados 1,3,4-tiadiazóis mesoiônicos MI-J e MI-D em células HEPG2 está relacionada aos seus efeitos sobre a bioenergética mitocondrial Resumo: O carcinoma hepatocelular (CHC) é considerado um dos mais incidentes e representa a segunda causa de morte por câncer no mundo. Uma vez que poucas terapias são eficazes para esse tipo de câncer, é essencial a busca por novas opções de tratamento. Neste contexto, os derivados mesoiônicos 1,3,4-tiadiazóis são promissores por apresentarem atividade citotóxica e antitumoral contra diferentes linhagens de células tumorais. Neste estudo foram avaliados os efeitos dos derivados 1,3,4-tiadiazóis MI-J e MI-D em células de hepatocarcinoma humano (HepG2), cultivadas em dois meios de cultura, um com alta concentração de glucose (MEIO AG), para direcionar o metabolismo para a via glicolítica e, outro sem glucose e com glutamina e galactose (MEIO GAL), para favorecer a fosforilação oxidativa. Em meio AG, no tempo de 24h, pelo método do MTT a viabilidade foi reduzida em ~23% por ambos derivados na concentração de 25 µM. Pelo método do cristal violeta nessas mesmas condições, a redução foi mais pronunciada (~47%) aumentando a redução nos outros tempos avaliados (48h e 72h). Na maior concentração (50 µM), a redução foi de ~90% para ambos compostos nos dois métodos. Essa citotoxicidade, na concentração de 50 µM, foi confirmada pelo aumento da atividade da enzima lactato desidrogenase (LDH), no meio de cultura, em ~90% após 24h de incubação. Em meio GAL, neste mesmo tempo de incubação, observou-se uma redução na viabilidade pelo método do MTT de ~57% para o MI-J e de ~20% para o MI-D, na menor concentração (5 µM), chegando a ~67% de redução para ambos os compostos na concentração de 50 µM. Pelo método do cristal violeta, na concentração de 5 µM, a citotoxicidade foi de ~19%, aumentando para ~49% na concentração intermediária (25 µM), com perfil semelhante para ambos os compostos em 24h. A enzima LDH apresentou maior atividade no tempo de 72h, com ~41% de aumento para o MI-J e ~36% para o MI-D, na concentração de 50 µM. Ensaios de respiração celular evidenciaram que o fluxo de oxigênio nas células HepG2 foi alterado com o aumento da concentração dos derivados, sendo estes efeitos mais pronunciados no meio GAL. Foi observada a diminuição nos níveis de ATP (~38%) na concentração de 25 µM do MI-J em meio GAL, enquanto que, em meio AG a redução observada para esse composto foi menos pronunciada (~27%). Nessa mesma concentração, o MI-D reduziu os níveis de ATP apenas em meio GAL (~15%). Em meio AG, ambos os compostos promoveram um aumento de ~32% nos níveis de lactato na concentração de 25 µM. Nessa concentração em meio GAL, os níveis de lactato aumentaram cerca de ~46% com o MI-J e ~35% com o MI-D. No mesmo meio, os níveis de piruvato diminuíram em ~15% após a exposição ao MI-J e ~ 9% com o MI-D. Em conjunto, estes resultados confirmam a toxicidade dos derivados MI-J e MI-D para as células HepG2. Também sugerem que o comprometimento de funções mitocondriais está relacionado à toxicidade dos derivados nestas células, uma vez que foram mais pronunciados em meio contendo galactose e glutamina.; Abstract: Hepatocellular carcinoma (HCC) is considered the most prevalent liver cancer and represents the second cause of cancer death worldwide. Since few therapies are effective for this type of cancer, the research for new treatments is essential. In this context, mesoionic derivatives from 1,3,4-thiadiazolium class are promising due to their cytotoxic and antitumor activities against different tumor cells. This study evaluated the effects of 1,3,4-thiadiazoles derivatives MI-J and MI-D on human hepatocarcinoma cells (HepG2). Two culture media were used, the first one containing glucose at high concentration (AG medium), with the aim of directing the metabolism to glycolic pathway and the other not containing glucose and supplemented with glutamine and galactose (GAL medium), to favoring the oxidative phosphorylation. In AG medium, MTT method showed a reduction of ~ 23%, for both derivatives, MI-J and MI-D (25 M). At the same conditions, crystal violet method also evidenced a reduction in the cells viability; however, it was more pronounced (at ~ 47%, 48h and 72h of incubation). At the highest concentration (50 µM), the derivatives reduced the viability around 90%, as showed by MTT and crystal violet methods. This cytotoxicity was confirmed by the increased activity of Lactate Dehydrogenase (LDH) for both culture media (~ 90%, 24h of incubation). In the GAL medium, the viability was reduced at ~ 57% and ~ 20%, for MI-J and MI-D (5 µM), respectively, as observed by MTT method, after 24h of incubation. This reduction reached to ~ 67% for both compounds at the concentration of 50 µM. When the method was crystal violet staining, the cytotoxicity of both derivatives was similar (~19%) at the lowest concentration (5 µM), increasing to ~ 49% at the intermediate concentration (25 µM). The LDH activity was increased after 72 h of incubation with the derivatives, by around 41% and 36%, for MI-J and MI-D (50 µM), respectively. The assays of cellular respiration in AG medium showed that the derivatives promoted a decrease in oxygen flux of HepG2 cells, in a concentration dependent way. The cellular respiration was changed by both derivatives in a concentration dependent way, being this effect more pronounced in GAL medium. ATP levels decreased (~38%) in response to incubation with MI-J (25 µM) after 24h of incubation in the GAL medium. In AG medium, this reduction was less pronounced (~27%). MID (25 µM) reduced the ATP levels only in GAL medium (~15%). In AG medium, both derivatives (25 µM) promoted an increase of ~ 32% in lactate levels, while in GAL medium the metabolite was increased about ~ 46% and 35% for MI-J and MI-D, respectively. In the same medium, pyruvate levels decreased at ~ 15% and 9% after 24h of exposure to MI-J and MI-D, respectively. Taken together, these results reinforce the toxicity of MI-J and MI-D on HepG2. The results also suggest that the impairment of mitochondrial functions is related to the toxicity of the derivatives in HepG2 cells, since their effects were more pronounced when these cells were cultured in medium supplemented with galactose and glutamine in the absence of glucose. Orientadora: Dra. Silvia Maria Suter Correia Cadena; Coorientador: Dra. Amanda do Rocio Andrade Pires; Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ciências - Bioquímica. Defesa : Curitiba, 28/03/2018; Inclui referências: p.76-85 Mon, 01 Jan 2018 00:00:00 GMT https://hdl.handle.net/1884/101812 2018-01-01T00:00:00Z