https://hdl.handle.net/1884/39849 2026-06-05T03:32:57Z https://hdl.handle.net/1884/42358 Desenvolvimento do bioprocesso de co-cultivo de mioblastos esqueléticos e células-tronco mesenquimais para a regeneração do miocárdio : modelo em murinos Resumo: No infarto do miocárdio e na doença de Chagas existem alguns mecanismos fisiopatológicos em comum: perda de cardiomiócitos devido à isquemia, à redução da contratilidade e à disfunção cardíaca. A terapia celular vem propondo o tratamento para a falência cardíaca usando vários tipos celulares. Objetivos: Desenvolver e avaliar o método de co-cultivo de mioblastos esqueléticos e célulastronco mesenquimais para a terapia celular no infarto do miocárdio (IM) e na doença de Chagas (DC). Materiais e métodos: IM- 39 ratos completaram o estudo após um mês, 17 ratos receberam a terapia com o produto celular do co-cultivo e 22 ratos, receberam apenas meio na cicatriz. Na DC- 15 ratos completaram o estudo após um mês, 07 ratos receberam o produto celular de co-cultivos autólogos e 08 receberam apenas o meio. Todos os animais realizaram ecocardiograma antes e após um mês de terapia. Os parâmetros analisados foram: fração de ejeção ventricular esquerda (FEVE); volume sistólico e diastólico finais. A análise estatística pela ANOVA. O cocultivo de mioblastos esqueléticos e células-tronco mesenquimais mantido por um período de 14 dias (DMEN, 15% SFB, 1% Antibiótico, IGF-I e dexametasona). Análises histológicas, de rotinas, foram realizadas. Resultados: Entre as provas funcionais verificou-se no grupo IM FEVE, nos animais, que receberam células do co-cultivo de 23,52 8,67 a 31,45 8, 87 (p=0,006) e no grupo 26,68 6,92 a 22,32 6, 94 (p=0,004) e no grupo DC FEVE, nos animais que receberam células do cocultivo de 31,10 5,78 a 53,37 5, 84 (p<0,001) e no grupo controle, 36,21 3,70 a 38,19 7,03 (p= 0,426). O exame histológico revelou, nos modelos de miocardiopatia estudados, miogênese e angiogênese naqueles animais, que receberam o produto celular de co-cultivo. Conclusão: Estes resultados validam o produto celular do co-cultivo de mioblastos esqueléticos e de células-tronco mesenquimais para o tratamento dessas duas doenças.; Abstract: In myocardial infarction and Chagas's disease some physiopathological aspects are common: cardiomyocyte loss due to ischemia leads to a reduction of contractility and heart function. Cell therapy has been proposed for the treatment of heart failure through transplant of various cells types. Objective: To develop and to evaluate the method of co-culture of skeletal muscle (SM) and mesenchymal stem cells (MSC) for cell therapy of heart failure in Myocardial Chagas's disease (MCD) and myocardial post-infarction (MI). Materials and methods: MI- 39 rats completed the study at one month. 17 rats received co-cultured cell therapy and 22 rats, only medium in the scar. MCD- 15 rats completed the study at one month. 7 rats received autogenous coculture cell therapy and 8 animals received only medium. All animals underwent ecocardiographic analysis at baseline and one month. The measures of Left Ventricular Ejection Fraction (LVEF), Left Ventricular End Systolic and Dyastolic Volume were registered and analyzed by ANOVA. The co-culture method of SM and MSC cells was performed at 14 days (medium culture: DMEN, with 15% FCS and 1% Antibiotic, IGF-I and dexamethasone). Standard stain analysis was done in the cells and tissue. Functional Results: MI- LVEF in the animals that had received the cocultured cells: 23,52 8,67 to 31,45 8, 87 p=0,006 versus control group: 26,68 6, 92 to 22,32 6, 94 p=0,004 and MCD- LVEF in animals that received the co-cultured cells: 31,10 5,78 to 53,37 5, 84 p<0,001 versus control group: 36,21 3,70 to 38,19 7,03 p= 0,426. Histopathogical Results: In both experimental model diseases, the analysis of the animals receiving co-cultured cells demonstrated a presence of myogenesis and angiogenesis. Conclusion: The results validate the product of the SM and MSC co-culture process for treatment in these diseases. Orientador : Prof. Dr. Waldemiro Gremski; Coorientador : Prof. Dr. Carlos Ricardo Soccol; Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Tecnologia, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia. Defesa: Curitiba, 20/12/2006; Inclui referências : f. 87-95; Área de concentração: Saúde animal e humana 2006-01-01T00:00:00Z https://hdl.handle.net/1884/43741 Leishmaniose tegumentar americana em cães no Estado do Paraná, Brasil. Avaliação do risco epidemiológico usando como ferramenta a reação em cadeia pela polimerase (PCR) Resumo: A leishmaniose tegumentar é uma doença parasitária provocada por um protozoário do gênero Leishmania sp., o qual é transmitido através da picada de dípteros da família Psychodidae, gênero Lutzomyia sp. No Brasil existem atualmente sete espécies de Leishmania responsáveis pela doença em humanos sendo que a Leishmania (Viannia) braziliensis e a Leishmania (Leishmania) amazonensis possuem maior distribuição geográfica e maior incidência. Várias espécies de flebotomíneos estão implicadas na transmissão do protozoário. Trata-se de uma doença que acompanha o homem desde os tempos remotos e que tem apresentado um aumento do número de casos e ampliação de sua ocorrência geográfica. Neste capítulo, são discutidos aspectos relacionados à doença, seu histórico, taxonomia, epidemiologia, seus vetores e reservatórios, métodos de diagnóstico, medidas de controle e tratamento.; Abstract: Leishmaniasis is a parasitic disease caused by protozoans of the genus Leishmania sp., which is transmitted through the bite of sandflies from the Psychodidae family, genus Lutzomyia sp. In Brazil, there are seven species of Leishmania responsible for the disease in humans; Leishmania (Viannia) braziliensis and Leishmania (Leishmania) amazonensis have wide geographical distribution and incidence. Several species of sandflies are involved in the transmission of the parasite. It is a disease that has accompanied humans since the ancient times and has shown an increase in the number of cases and also in its geographical distribution. In this study, we discuss several aspects related to the disease, its history, taxonomy, epidemiology, vectors and reservoirs, diagnostics, control measures and treatment. Orientador: Profª. Drª. Vanete Thomaz Soccol; Coorientador: Prof. Dr. Italmar Teodorico Navarro; Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Tecnologia, Programa de Pós-Graduação em Processos Biotecnológicos. Defesa: Curitiba, 07/07/2010; Inclui referências; Área de concentração: Saúde Humana e Animal 2010-01-01T00:00:00Z https://hdl.handle.net/1884/80799 Caracterização de celulases derivadas de cepas recombinantes de Trichoderma reesei e uso no tratamento de fibras celulósicas comerciais Resumo: Preparações enzimáticas obtidas a partir de cepas recombinantes do fungo Trichoderma reesei (Rohm Enzyme Finland Oy, Finlândia) foram inicialmente caracterizadas com relação às suas atividades específicas e teor protéico, sendo posteriormente comparadas a um sistema celulásico completo representado pela preparação industrial Celluclast 1.5L® (Novo Nordisk). Foram oito as preparações enzimáticas obtidas a partir das cepas recombinantes, a saber, quatro enzimas de supressão isolada (A, CBH I-; B, CBH II-; C, EG I-; D, EG II-), duas de supressão dupla (E, CBH I/II-; F, EG I/II-) e duas de supressão tripla (G, EG II-/CBH I/H-; H, CBH II-/EG I/n-). A atividade protéica das enzimas recombinantes mostrou-se substancialmente diferente da atividade observada em Celluclast 1.5L®. Esta observação foi decorrente do ensaio de atividade contra vários substratos incluindo papel de filtro, celobiose, p-nitrofenil-glucosídeo, p-nitrofenil-lactosídeo, xilana de aveia, xilana de vidoeiro, carboximetilcelulose, hidroxietilcelulose (HEC) e azocaseína. A inclusão desse último substrato foi necessária para que se pudesse demonstrar a presença de atividade proteásica residual em todas as preparações enzimáticas. A análise cromatográfica por FPLC (Fast Protein Liquid Chromatography) foi usada para separar os componentes das preparações celulásicas de acordo com o pi e raio hidrodinâmico, seguindo-se de análises de atividade específica em cada fiação coleta. A coeluição de CBH II com outras enzim as presentes no sistema celulásico (por exemplo, EG I) foi caracterizada por ensaios imunoquímicos utilizando anticorpos monoclonais, enquanto que a ocorrência de EG II foi testada baseando-se na capacidade da fiação enzimática em hidrolisar a ligação heterosídica do metilumbeliferil-ß-D-celotriosídeo. Por outro lado, a presença do domínio catalítico de CBH I em frações específicas do FPLC foi determinada por cromatografia de interação hidrofóbica, sendo que o ensaio contra metilumbeliferil-ß-D-celotriosídeo, na presença e ausência de celobiose, serviu de estratégia para confirmar a ausência de EG I nos volumes de eluição de CBH I e de seu respectivo domínio catalítico livre. Os principais constituintes proteicos do sistema celulásico de T. reesei foram separados em cinco frações: EG II e Hl na fração Fl, EG II e CBH II na fração F2, CBH II e EG I na fração F3, EG I na fração F4 e CBH I na fração F5. Entretanto, para todas as enzimas de A a H, a fração do FPLC (fração F5) que continha a CBH I, esta fração para muitas das enzimas demonstrou ser quase que exclusivamente constituída de domínio catalítico livre. Em condições específicas de hidrólise (4 mg de proteína por grama de polpa seca por 2 horas à 45°C, 145 rpm) foram ensaiadas fibras celulósicas de pinus e eucalipto provindas de processo Kraft, nenhuma das preparações enzimáticas em estudo apresentou um efeito significativo sobre o grau de polimerização da celulose. A única exceção a esta regra foi o comportamento da enzima E sobre polpa de eucalipto, provavelmente devido a sua alta atividade específica sobre substratos de caráter amorfo mais pronunciado (alta atividade endoglucanásica). A enzima G forneceu os melhores resultados sobre as propriedades de polpas Kraft branqueadas de eucalipto para a confecção do papel. Ganhos foram observados em quase todas as propriedades mecânicas às quais os corpos de prova foram submetidos. No entanto, um pequeno efeito foi detectado sobre a resistência ao rasgo dos corpos de prova. A enzima G também apresentou um efeito bastante favorável sobre as propriedades da polpa Kraft branqueada derivada de pinus. Um aumento de 36% na resistência à tração foi observado nos corpos de prova ensaiados sem que qualquer efeito fosse detectado nas resistências ao alongamento e arrebentamento (estouro). Porém, a resistência ao rasgo foi comprometida em cerca de 22% em relação ao controle. Computados os efeitos sobre todas as propriedades dos corpos de prova, a enrima H foi a que proporcionou o melhor resultado sobre polpas de pinus porque não apresentou qualquer efeito negativo sobre a resistência ao rasgo.; Abstract: Enzyme preparations from eight deletion strains of Trichoderma reesei were initially characterized in regard to their specific activities and protein profile and subsequently compared to the complete cellulase system of the industrial enzyme preparation Celluclast 1.5L (Novo Nordisk). The enzyme preparations derived from recombinant strains of T. reesei were kindly provided by Rohm Enzyme Finland Oy and were formerly classified as mono, di and tri-deletion preparations, namely 4 single (A, CBHI-; B, CBHII-; C, EG I-; D, EG II-), 2 double- (E, CBHI/H-; F, EG I/II-) and 2 tri-deletion enzymes (G, EG II-/CBH I/E-; H, CBH II-/EGI/II-). The activity profile of the recombinant enzymes was shown to be substantially different from that of Celluclast 1.5L. This was observed against a range of model substrates including filter paper, cellobiose, p-nitrophenyl-glucoside, pnitrophenyl- lactoside, oat spelt xylan, larchwood xylan, carboxymethylcellulose, hydroxyethylcellulose (HEC) and azocasein. Inclusion of the latter substrate was required because all of the enzyme preparations were shown to variable amounts of residual protease activity. Fast protein liquid chromatography was used to characterize each cellulase preparations in regard to their protein profile and specific activity against HEC. The band-spreading and/or co-elution of CBH II with other enzyme components of the cellulase system (e.g., EG I) was characterized by immunochemical assays using monoclonal antibodies, whereas the occurrence of EG II was assessed based on the capability of the enzyme fractions to cleave the heterosidic bond of methylumbellyferyl-ß-D-cellotrioside. On the other hand, the occurrence of CBH I core protein within the CBH I fraction of the FPLC profile was determined by hydrophobic interaction chromatography. This CBH I fraction, containing either the truncated or untruncated enzyme, was also assayed against methylumbellyferyl-ß-Dlactoside, in the presence and absence of cellobiose, to ensure that this protein band was not contaminated with any EG I activity. The main protein constituents of the T. reesei cellulase system were pooled into five fractions containing EG II and HI (fraction 1), EGII and CBH II (fraction 2), CBH II and EG I (fraction 3), EG I (fraction 4) and CBH I (fraction 5). However, the CBH I fraction of the FPLC profile (fraction 5) was demonstrated to be almost exclusively composed of the CBH I core protein in all of the recombinant enzyme preparations. Under the conditions used for fiber modification (4 mg of protein per gram of dry pulp for 2 h at 45°C, 145 rpm), none of the enzyme preparations had a significant effect of pulp cellulose degree of polymerization. The only exception to this rule was enzyme E on eucalyptus pulp, probably due to its high specific activity against amorphous cellulose (high endoglucanase activity). Enzyme G provided the best treatment for fiber modification of eucalypt Kraft pulps, with improvement of all mechanical properties tested in this study except tearing. The enzyme G also had a favorable effect on pine Kraft pulp. A 36% increase in tensile strength was observed with no detectable effect on both stretching and bursting strength, but handsheet tearing was decreased by 22% in relation to the control. However, enzyme H provided the best handsheet properties of pine Kraft pulps. These results provide further evidence to the widely accepted contribution that genetic engineering may have to the development of efficient enzymes systems to modify pulp fibers. In this regard, both double and three deletion enzymes derived from recombinant T. reesei strains have shown interesting properties for fiber modification in pulp and paper manufacturing. Orientador: Prof. Dr. Luiz Pereira Ramos; Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Tecnologia, Curso de Pós-Graduação em Processos Biotecnológicos. Defesa: Curitiba, 01/10/2001; Inclui referências: p. 158-174; Área de concentração: Agroindústria 2001-01-01T00:00:00Z https://hdl.handle.net/1884/79866 Desenvolvimento de bioprocesso para a produção de goma Xantana a partir de resíduos agroindustriais de café e de mandioca Resumo: Resíduos agroindustriais, como casca de café e bagaço de mandioca, são importantes fontes de carbono para processos fermentativos. O Brasil é o segundo maior produtor mundial de mandioca produzindo na safra 1999/2000 22,9 milhões de tonelada, e o maior produtor mundial de café produzindo em 1998 mais de 1,6 milhões de toneladas de grãos de café. O processamento da raiz de mandioca para obtenção da fécula ou amido gera como resíduo sólido, o bagaço de mandioca, que pode ser utilizado como ração animal ou descartado. A casca de café é o resíduo do beneficiamento das cerejas café para a obtenção dos grãos. Estes resíduos podem ser utilizados na forma sólida em processos de compostagem ou fermentação no estado sólido, ou na forma de seus hidrolisados, compostos basicamente dos açúcares solúveis presentes nos resíduos. Goma xantana é um exopolissacarídeo produzido pela bactéria Xanthomonas campestris, por fermentação da glicose, com diversas aplicações na indústria química, têxtil, de tintas, cerâmicas, além de vasta aplicação na indústria farmacêutica, de cosméticos e de alimentos, na fabricação de geléias, pudins, temperos, enlatados, congelados e bebidas. O trabalho desenvolveu um processo para a obtenção da goma xantana utilizando o hidrolisado de resíduos agroindustriais (Patente SOCCOL, C.R., et all 2000). Foram definidas as condições de hidrólise do amido presente no bagaço de mandioca, e das cascas de café, para a obtenção dos hidrolisados, temperatura de 120°C, tempo de hidrólise de 10 minutos e para o bagaço de mandioca, concentração de ácido clorídrico de 1%. A concentração de 20 g/L de glicose, obtida na hidrólise de bagaço de mandioca, foi a melhor para o processo e o nitrato de potássio, a melhor fonte de nitrogênio dentre os testados, extrato de levedura, peptona, nitrato de potássio, sulfato de amónio e uréia, com uma produção de goma xantana de 14,03 g/L, com um fator de conversão de substrato em produto de 76,42%. Análises de absorção na região do infravermelho das gomas produzidas com as fontes de nitrogênio testadas e a goma xantana comercial, mostraram a semelhança dos produtos, e análises reológicas mostraram que a goma xantana produzida com hidrolisado de bagaço de mandioca e nitrato de potássio é semelhante á goma xantana comercial.; Abstract: Cassava root is the third starch source of the world, with a production of 150 millions tons of roots. Brazil is the second world producer; cassava roots national production at 1999/2000 was estimated by IBGE(Instituto Brasileiro de Geografia e Estatística) in 22,9 millions tons. This production is destínated to the industries of cassava meal, starch and deríveds, as far as the consumption "in natura". The activities along the cassava roots industrialization, origin a very important solid residue; this residues, cassava bagasse, rich in starch, not extracted during the processment, is used in part as animal feed, and in part is discharged at the environment, causing hard pollution problems (IPARDES, 1986). Xanthan gum is a polysaccharide exocellular produced industrially by the bacteria Xanthomonas campestris, fermenting glucose, with many applications at textiles industries, paints, and a very important applications in food industries to produce jams, sauces, drinks,flans, etc. (WHISTLER, 1973). This work presented, develops a process to the production of xanthan gum using the cassava bagasse hydrolysate (Patent SOCCOL, C.R., et all, 2000). The first part of the work was the optimization of the hydrolysis condition of the residual starch presented at the cassava bagasse to obtain the hydrolysate composed basically of glucose. Then it was done the optimization of the substrate composition to the fermentation. The best glucose concentration was 20 g/L and the best nitrogen source to the process among those tested, yeast extract peptone, potassium nitrate, ammonium sulfate and urea, was potassium nitrate. It was done reological analysis and of absorption at the infra-red region of the gums produced with the nitrogen sources tested and the results were similar to the data obtained of the analysis done with the commercial xanthan gum. So this work intended to add value to this Brazilian agro industrial residue, and contribute to decrease the environmental pollution with the reuse of a residue. Besides it is present an alternative to decrease the xanthan gum productions costs. Orientador: Prof. Dr. Carlos Ricardo Soccol; Coorientador: Prof. Dr. Ashok Pandey; Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Tecnologia, Curso de Doutorado em Processos Biotecnológicos; Inclui referências: p. 143-153 2001-01-01T00:00:00Z