https://hdl.handle.net/1884/39849 2026-04-25T18:39:16Z https://hdl.handle.net/1884/63350 Uso de peptideos para diagnóstico imunológico de hanseníase Resumo: A hanseníase é uma doença infecciosa crônica causada pelo Mycobacterium leprae que acomete principalmente a pele e os nervos periféricos. Apesar da redução da prevalência no mundo, o número de novos casos tem se mantido constante nos últimos anos. Uma das dificuldades encontradas no controle da doença reside na falta de teste de diagnóstico específico de detecção de infecção por M. leprae. O objetivo desse estudo foi identificar antígenos para fins de diagnóstico. Nesse sentido, peptídeos ligantes de anticorpos de pacientes hansenianos foram selecionados de bibliotecas de peptídeos apresentados em fagos. Dentre sete clones de fagos selecionados, três clones se mostraram promissores e suas sequências peptídicas foram sintetizadas quimicamente. O teste ELISA usando pool dos três peptídeos permitiu identificar 52,2% (12/23) dos pacientes hansenianos multibacilares. Cinco de um total de trinta pacientes (16,7%) com tuberculose apresentaram teste positivo frente aos peptídeos. Nenhuma das amostras de pacientes hansenianos paucibacilares, bem como de contatos de pacientes hansenianos e sadios foi positiva pelo ensaio. Os peptídeos não foram reativos frente aos antisoros de diferentes micobactérias produzidos em coelhos. Peptídeos conjugados a proteína carreadora albumina sérica bovina (BSA) induziram a produção de anticorpos em animais. Os anticorpos antipeptídeos foram capazes de reconhecer antígenos de aproximadamente 30 kDa em M. leprae por Western Blotting. Todos os soros antipeptídeos produziram o mesmo perfil de reatividade por análise de Western Blotting a partir de um gel bidimensional de antígenos de M. leprae, indicando que os peptídeos são derivados de uma mesma proteína do bacilo. Dados experimentais associados aos obtidos por bioinformática indicam que a proteína se trata do antígeno 85B. Dois dos três peptídeos mostraram evidências em estimular células T através de teste de reação de hipersensibilidade do tipo tardio. Os resultados indicaram que os peptídeos são reagentes potenciais em ensaios imunológicos, tanto sorológicos, quanto celulares, para detecção da doença. O uso da metodologia descrita aqui permitirá a identificação de outros peptídeos, que combinados aos propostos neste trabalho, possibilitarão aumentar a sensibilidade do diagnóstico de pacientes hansenianos.; Abstract: Leprosy is a chronic infectious disease caused by Mycobacterium leprae that mainly affects the skin and peripheral nerves. Despite reductions in prevalence worldwide, the number of new cases has remained constant in recent years. One of the difficulties in controlling the disease is the lack of specific diagnostic test for detecting infection by M. leprae. The aim of this study was to identify antigens for diagnostic purposes. For these purposes, antibody binding peptides of leprosy patients were selected from phage displayed peptide libraries. Among seven clones of selected phages, three clones were promising and their peptides sequences were chemically synthesized. The ELISA test using three peptides pool permitted the identification of 52.2% (12/23) of multibacillary leprosy patients. Five out of thirty patients (16.7%) with tuberculosis had a positive test with the peptides. None of the samples coming from the paucibacillary leprosy patients, contacts of leprosy patients and healthy individuals for the test were positive. The peptides were not reactive to antisera against different mycobacteria produced in rabbits. The peptides conjugated to the carrier protein bovine serum albumin (BSA) induced the production of antibodies in animals. Antipeptides antibodies were able to recognize antigens of approximately 30 kDa in M. leprae by Western blotting. All sera antipeptides produced the same profile of reactivity by Western blot analysis from a two-dimensional gel of M. leprae antigens, indicating that the peptides are derived from the same bacillus protein. Experimental data associated with those obtained by bioinformatics indicated that the protein is the antigen 85B. Two of the three peptides showed evidence of stimulating T cells through delayed-type hypersensitivity reaction. The results indicated that the peptides are potential reagents in immunological assays, both serologic and cellular, to detect the disease. Using the methodology described here will allow the identification of other peptides, that when matched those proposed in this research, will enable the increase of the sensitivity of leprosy patients diagnosis. Orientadora: Profª Drª Vanete Thomaz Soccol; Coorientadora: Profª. Drª. Juliana Ferreira de Moura; Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Tecnologia, Programa de Pós-Graduaçao em Processos Biotecnológicos. Defesa: Curitiba, 31/05/2011; Bibliografia: f. 110-130; Área de concentração: Saúde humana e animal 2011-01-01T00:00:00Z https://hdl.handle.net/1884/80809 Valorização biotecnológica do hidrolisado fosfórico de amido de mandioca : produção de biomassa e astaxantina utilizando a levedura Xanthophyllomyces dendrorhous Resumo: Tradicionalmente as hidrólises ácidas de materiais amiláceos são realizadas utilizando o ácido clorídrico. O ácido fosfórico foi empregado com sucesso, alternativamente, como agente catalítico nos procedimentos de hidrólise do amido de mandioca, com a vantagem de diminuir a formação de produtos de degradação ou desidratação da glucose, como o HMF (hidroximetilfurfural). Além do mais, a neutralização do hidrolisado fosfórico com hidróxido de amónia, gerou vantajosamente o fosfato de amónio, um co-nutriente amplamente utilizado nos processos biotecnológicos. Parâmetros cinéticos, como temperatura / pressão (entre 152 a 176°C / 4 a 8 atm), concentração do ácido (entre pH 1,4 a 3,0) e tempo de hidrólise (entre 5 a 20 minutos), foram aplicados para a depolimerização de pasta concentrada de amido (40% de sólidos totais como fécula) em maltooligossacarídeos e/ou xarope de glucose. Os xaropes obtidos da hidrólise fosfórica do amido foram empregados como fonte de carbono em processos fermentativos, na produção da levedura carotenogênica Xanthophyllomyces dendrorhous (antes, Phaffía rhodozyma) produtora do pigmento intracelular astaxantina. Cultivos realizados com hidrolisados apresentando DE (equivalente em dextrose) em torno de 50, revelaram a habilidade bioquímica da Xanthophyllomyces dendrorhous em metabolizar além da glucose e/ou maltose, maltooligossacarídeos, com grau de polimerização maior do que 3 unidades de glucose, com alto rendimento de produção de astaxantina. Várias fontes de nitrogênio alternativas tais como alguns aminoácidos, farinha de soja, caseína hidrolisada, uréia, nitrato de potássio, manipueira e nitrato de amónio foram utilizadas na suplementação dos meios de cultivos. A manipueira, subproduto poluente e definida como a água residual do processo de extração do amido de mandioca (feculagem), foi adicionada ao hidrolisado fosfórico de mandioca, e proporcionou incremento na produção de biomassa (948mg%). A adição de nitrato de amónia ao meio de fermentação contendo manipueira resultou em aumento da astaxantinogênese em Xanthophyllomyces dendrorhous (477jig/g de células secas) obtido com o hidrolisado fosfórico pH 1,75, 152 °C/4atm e 15min. Condições mais severas de hidrólise, como temperatura de 176°C (8 atm), levaram a formação de produtos de degradação causadores de inibição do crescimento da X. dendrorhous. Experimentos preliminares de produção de ácido lático pelas bactérias Lactobacillus plantarum e Pediococcus pentosaceus também foram testados como modelo biotecnológico, para os hidrolisados fosfóricos de amido de mandioca, onde foram produzidos aproximadamente 21 g/l de ácido lático.; Abstract: Even though starch materials are usually hydrolysed using hydrochloric acid as the catalytic agent, phosphoric acid has also been used as a suitable catalyst for the hydrolysis of cassava starch. As such, phosphoric acid has the advantage of reducing the formation of dehydration by-products such as HMF (hydroxymethyfurfural). In addition, the neutralization of the reaction mixture with ammonium hydroxide advantageously generates ammonium phosphate, a co-nutrient largely used in biotechnology processes. In this work, the kinetic parameters used in this procedure, such as temperature / pressure (152°C - 176°C / 4 - 8 atm ), acid concentration (pH 1.4 - 3.0) and length of hydrolysis (5 - 20 minutes), were optimized for the conversion of concentrated starch slurries (40% total solids, w/v) to maltooligossacharides and/or glucose syrups. The syrup obtained from the starch phosphoric acid hydrolysis was used as a source of carbon for the production of the intracellular pigment asthaxantin by the yeast Xanthophyllomyces dendrorhous (formerly, Phaffia rhodozyma). Cultures resulting from these hydrolysates, showing a DE (dextrose equivalent) of approximately 50, revealed the biochemical ability of Xanthophyllomyces dendrorhous to metabolize, beyond glucose and maltose, maltooligosaccharides with a DE greater than 3 to asthaxantin in high yields. Various alternative nitrogen sources such as some amino acid mixtures, soybean flour, casein hydrolysate, urea, potassium nitrate, "manipueira" and ammonium nitrate were evaluated as suitable supplements for the culture media. Manipueira, a pollulant by-product defined as the residual water derived from the industrial production of cassava starch (fecula), produced an increase of yeast biomass production (948 mg / %) when added to the fermentation media together with phosphoric acid-hydrolyzed starch. On the other hand, addition of ammonium nitrate to the fermentation media containing manipueira resulted in an increase of asthaxantinogenesis in X. dendrorhous (477pg/g of dry cell) from phosphoric hydrolysate (pH1.75, 152°C/4 atm and 15 min). More drastic conditions for hydrolysis, such as temperatures of 176°C (8atm), triggered formation of degrading subproducts that inhibited yeast growth. Preliminary experiments for the production of lactic acid by bacteria such as Lactobacillus plantarum and Pediococcus pentosaceus indicated that, for the phosphoric acid-hydrolyzed starch, approximately 21g/l of lactic acid was produced. Orientador: Prof. Dr. José Domingos Fontana; Coorientador: Prof. Dr. Luiz Pereira Ramos; Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Tecnologia, Programa de Pós-Graduação em Processos Biotecnológicos; Inclui referências: p. 142-150; Área de concentração: Agroindústria 2002-01-01T00:00:00Z https://hdl.handle.net/1884/81369 Fungos, endofíticos do milho (Zea mays L.) e da soja (Glycine max (L.) Merril) e seu potencial biotecnológico no controle de pragas agrícolas Resumo: Fungos endofíticos foram isolados dos hospedeiros tropicais milho (Zea mays L.) e soja (Glycine max (L.) Merril). Os fungos foram isolados de plantas originadas do campo e de casa de vegetação, de diferentes órgãos vegetativos das plantas; folhas e colmos do milho e folhas e hastes da soja e coletadas em diferentes idades aos 20 dias e aos 40 dias após a germinação das sementes. Foram isolados nove grupos de fungos do milho e isolados oito grupos da soja. Os gêneros encontrados foram: Colletotrichum sp., Fusarium sp., Acremonium sp., Aspergillus sp., Pénicillium sp., Mycelia sterilia, Beauveria sp., Paecilomyces sp. e fungos dematiáceos. Na soja não foi encontrado o gênero Beauveria sp.. Dentre estes fungos endofíticos dois importantes entornopatógenos Beauveria sp. e Paecilomyces sp. foram isolados em condições de campo e casa de vegetação. Foram detectadas diferenças qualitativas e quantitativas entre os isolados de milho e soja e dentro das culturas, em relação a micobiota de hospedeiros provenientes do campo em comparação com os de casa de vegetação.; Abstract: Endophytic fungi were isolated from two tropical host, maize and soybean. Fungal species isolated from plants in the field and in the greenhouse, were found in different organs : the leaves and stems of maize and leaves and stems of soybean. They were collected at twenty days and forty days after seed germination. Were isolated nine groups the fungi of maize and eight groups of soybean. The genus founded were: Colletotrichum sp., Fusarium sp., Acremonium sp., Aspergillus sp., Pénicillium sp., Mycelia sterilia, Beauveria sp., Paecilomyces sp. and dematiaceous fungi, but no Beauveria sp was found in soybean. Among these endophytic fungi two important entomopathogenous Beauveria sp and Paecilomyces sp. were isolated from the field and greenhouse plants. Qualitative and quantitative differences were detected among these isolates of maize and soybean and between these cultures in relation to the microbiota from field hosts when compared to greenhouse hosts. Orientador: Prof. Dr. João Lúcio de Azevedo; Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Tecnologia, Programa de Pós-Graduação em Processos Biotecnológicos; Inclui referências: p. 111-144; Área de concentração: Agroindústria 2001-01-01T00:00:00Z https://hdl.handle.net/1884/79690 Diagnóstico sorológico, isolamento, cultivo e caracterizaçao molecular de Neospora caninum em bovinos leiteiros e em eqüinos no estado do Paraná, Brasil Resumo: O presente estudo teve por objetivo verificar a presença do protozoário Neospora caninum em bovinos e eqüinos procedentes de regiões distintas do Paraná. As amostras de soro dos animais foram avaliadas pelos métodos de imunofluorescência indireta e por ensaio imunoenzimático, para detectar os anticorpos contra N. caninum. As técnicas de isolamento em cultivo celular e em animais de laboratório foram empregadas para obter as cepas de N. caninum, a partir de amostras de cérebro de fetos e de bezerros. A detecção de anticorpos contra N. caninum em bovinos de todas as categorias, e em éguas, demonstraram uma exposição anterior ao parasita, nas regiões de Carambeí, Witmarsum, Quatro Barras, São José dos Pinhais e Campo Largo. O isolamento de cinco cepas de N. caninum em células Vero, e a caracterização molecular pela reação da polimerase em cadeia (PCR), confirmaram a neosporose clínica em fetos bovinos e eqüinos, e em bezerro com sinais neurológicos. As cepas de N. ccminum apresentaram diferenças de comportamento nos cultivos celulares, em relação aos períodos de isolamento, de estabelecimento, ao crescimento, a produção de antígenos com e sem a suplementação de soro no meio, e a recuperação. As inoculações dos taquizoítas de N. ccminum em camundongos Swiss Webster e em gerbils imunocompetentes, demonstraram uma resistência destes animais ao parasita, e uma pequena produção de cistos nos cérebros. As inoculações orais de tecidos de bezerros em cães, induziram a eliminação de oocistos não esporulados de N. ccminum nas fezes. As análises por PCR da seqüência Nc5 do DNA das cepas de N. caninum demonstraram diferenças genéticas entre as cepas isoladas de bovinos, de acordo com a região e a raça, e uma variabilidade genética entre as cepas de N. caninum de eqüinos, isoladas na mesma região. As cepas de N. caninum induziram anormalidades no sistema nervoso central e abortos em bovinos e em eqüinos. Os bovinos leiteiros e os eqüinos procedentes de propriedades com histórico de abortos apresentaram uma alta prevalência de anticorpos contra N. caninum. O diagnóstico de neosporose deveria ser incluído nos casos de abortos e doenças neurológicas em bovinos e eqüinos, devido ao isolamento de N. caninum dos fetos e bezerros.; Abstract: This study was designed to detect the Neospora caninum infections in bovine and equine from different regions of Parana State. The sera were screened for antibodies against N. caninum using an indirect fluorescent antibody test and an enzyme-linked immunosorbent assay. Cell culture and mouse inoculations were used to recover Neospora from bovine and equine fetuses and from calves. Antibodies to N. caninum were found in calves, heifers, adult cows and mares. These results provided indication that N. caninum is established in cattle and horses in Carambei, Witmarsum, Quatro Barras, São José dos Pinhais and Campo Largo. Five strains of Neospra were isolated in Vero cells and the identities of the parasites were confirmed by polymerase chain reaction (PCR). These isolates have confirmed the Neospora infection in bovine and equine fetuses and in a calf with nervous system abnormalities. The strains of Neospora had different in vitro growth characteristics. The tachyzoite yields were determined in non-serum supplemented medium and with horse serum. Isolates of N. caninum did not produce infection in Swiss Webster mice and gerbils. The number of tissue cysts produced was low. Unsporulated oocysts were shed in the feces of a dog following consumption of infected calf. PCR analysis of the protozoan strains DNA provided evidence for genetic differences among the isolates of N. caninum. Neospora infection caused bovine and equine abortion and nervous system abnormalities in a calf. A high seroprevalence of antibodies to N. caninum was found in cattle from herd with endemic pattern of abortion and in mares from a case of epidemic abortion. These finding and the isolation of the parasite from bovine and equine suggest that the diagnosis of Neospora infection should be included in cases of abortion and neurological diseases in these species. Orientadora: Vanete Thomaz Soccol; Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Tecnologica, Programa de Pós-Graduação em Processos Biotecnológicos 2002-01-01T00:00:00Z