https://hdl.handle.net/1884/39616 2026-09-26T01:37:07Z https://hdl.handle.net/1884/105781 Avaliação do potencial imunomodulador de uma ß-galactana isolada dos frutos de Sicana odorifera, Cucurbitaceae Resumo: Polissacarídeos isolados de diferentes partes de plantas apresentam grande potencial de aplicação biológica, por exibirem baixa toxicidade. Diversas partes da planta da espécie Sicana odorifera são comumente utilizadas para fins medicinais. Recentemente, foi isolada uma ß-D (1->4)-galactana dos frutos de S. odorifera e no presente estudo os efeitos deste polissacarídeo em macrófagos peritoneais de camundongos foram investigados. Para isto, os macrófagos foram isolados, plaqueados e incubados com o ou sem polissacarídeo, por 6, 24 e 48 horas. Inicialmente foram avaliados quanto a viabilidade celular pelo método de metil- tetrazólio (MTT). Posteriormente, analisou-se as alterações na morfologia por microscopia optica, a atividade fagocítica pela fagocitose de S. cerevisae, a produção de ânion superóxido pelo método de nitroblue tetrazolium (NBT), a produção de óxido nítrico pelo método de Griess e a dosagem de interleucinas1 beta e 10 (IL-1ß e IL-10) e fator de necrose tumoral alfa (TNF-a) pelo método de ELISA. Os resultados mostram que em 24h de incubação 100 µg/mL da ß-D galactana diminuiu a viabilidade dos macrófagos em cerca de 20%. Ao contrário, em 48h houve aumento na viabilidade de 25% e 32% nas concentrações de 50 µg/mL e 100 µg/mL, respectivamente. Os grupos tratados com 50 µg/mL e 100 µg/mL do polissacarídeo promoveram diminuição de 47% e 67%, respectivamente, no número de macrófagos com perfil morfológico de ativação. A atividade fagocítica avaliada pela fagocitose de leveduras, após 48h de tratamento dos macrófagos com a ß-D galactana foi reduzida em ~ 50% com 50µg/mL, em relação ao grupo não tratado. Na presença de LPS (100 ng/mL) e a ß-D galactana a diminuição da atividade fagocítica foi de 40% e 33%, com 50 µg/mL e 100 µg/mL, respectivamente, em relação ao grupo tratado somente com LPS. A ß-D galactana não interferiu na produção de ânion superóxido pelos macrófagos em 1h de incubação. Por outro lado, a incubação na presença de LPS (100 ng/mL) e a ß-D galactana (50 µg/mL e 100 µg/mL), em ambas as concentrações houve redução de 70% na produção de ânion superóxido, comparado aos macrófagos tratados somente com o LPS. Em relação a produção de óxido nitrico em 48h, somente no tratamento simultâneo dos macrófagos com LPS 100 ng/mL juntamente com 50 µg/mL da ß-D galactana foi observado redução (19%) na produção deste mediador, em relação ao grupo tratado somente com LPS. Para as citocinas pró-inflamatórias avaliadas, em 6h de incubação 50 µg/mL da ß-D galactana aumentou em 100% a produção de TNF-a pelos macrófagos, em relação ao grupo não tratado, enquanto que 100 µg/mL do polímero não interferiu de forma significativa na produção desta interleucina. Macrófagos incubados durante 48h com 100 µg/mL da ß-D galactana reduziram em 95% na produção de IL-1ß, comparado ao controle sem tratamento. Em relação a produção de IL-10, uma citocina anti-inflamatória, 100 µg/mL da ß-D galactana promoveu aumento de 57%, em comparação aos macrófagos sem tratamento. Em conjuntos os resultados deste estudo demonstraram que a ß-D(1->4)-galactana de S. odorifera possui perfil imunossupressor; Abstract: Polysaccharides isolated from different plants show great potential of biological application, due their low toxicity. The Sicana odorifera specie is commonly used for medicinal purposes. Recently was isolated a ß-D(1->4)-galactan from fruit of S. odorifera and, in this present study the effects of this polysaccharide on mice peritoneal macrophages were investigated. To this, the macrophages were isolated, plated and incubated with or without the polysaccharide during 6, 24 and 48 hours. Initialy were evaluated for viability by the MTT method. Subsequently were evaluated the morphology changes by optical microscopy, the phagocytosis activity assessed by S. cerevisae , the production of superoxide anion by nitro blue tetrazolium (NBT) method, the production of nitric oxide by Griess method and dosage interleukin 1ß and 10 (IL-1ß and IL-10) and, tumor necrosis factor alpha (TNF-a) and by ELISA. The results show that in 24h of incubation 100 µg/mL of ß-D galactan diminished the cell viability of macrophages at 20%. In contrast, an increase of 25% and 32% with 50 µg/mL and 100 µg/mL, respectively in 48h, when compared with untreated group, was observed. The treated groups with 50 µg/mL and 100 µg/mL of the polysaccharide promoted decreasing of 47% and 67%, respectively, in the macrophages number with morphologic caracteristics of activation. The phagocytic activity after 48h of treatment of macrophages with the ß-D galactan was reduced in 50% with 50 µg/mL, in relation the untreated group. In the presence of LPS (100 ng/mL) and ß-D galactan the reducing in this parameter was of 40% and 33%, with 50 µg/mL and 100 µg/mL, respectively, in comparison with the treated group with only LPS. The ß-D galactan did not interfer in the superoxide anion production by macrophages for 1h of incubation. On the other hand, in the presence of LPS (100 ng/mL) and ß-D galactan (50 µg/mL and 100 µg/mL), for both concentrations the superoxide anion production was reduced at 70%, in comparison to macrophages in the presence only LPS. Regarding the production of nitric oxide for 48h, only in the treatment of macrophages with LPS 100 ng/mL plus 50 µg/mL of ß-D galactan was observed reduction of 20% in the level this mediator, in relation to the group treated with LPS. To the pro-inflammatory interleukins measured, in 6h of incubation 50 µg/mL of ß-D galactan increased at 100% the production of TNF-a by macrophages, in comparison to untreated group, while 100 µg/mL of the polymer did not interfer significantly in this interleukin production. Macrophages incubated during 48h with ß-D galactan (100 µg/mL) reduced at 95% the production of IL-1ß, compared with untreated cells. Concerning to IL-10 production, an anti- inflammatory interleukin, 100 µg/mL of ß-D galactan promoted an increasing of 57%, in comparison to control without treatment. Taken together, the results of this study show that the ß-D (1->4)-galactan of S. odorifera trigger an immunossupressor profile Orientadora: Prof.ª Dr.ª Guilhermina Rodrigues Noleto; Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ciências (Bioquímica). Defesa: Curitiba, 29/09/2015; Inclui referências 2015-01-01T00:00:00Z https://hdl.handle.net/1884/100331 O efeito crabtree em celulas Hela : papel da Piruvato Quinase Resumo: Estudou-se o EFEITO CRABTREE em células HeLa utilizando-as intactas ou permeabilizadas com digitonina e em sistemas reconstituídos de mitocôndrias isoladas de fígado de rato e fração solúvel de células HeLa. Verificou-se em células permeabilizadas que a inibição do consumo de oxigênio é provocada por vários intermediários fosforilados da via glicolítica. Nesta situação o E. C. foi particularmente significativo quando se usou o PEP, indicando a participação da piruvato quinase na determinação dessa característica metabólica. Demonstrou-se ainda que o E. C. é parcialmente revertido por ATP e ADP na ordem direta do aumento de suas concentrações. Os experimentos realizados em sistema reconstituído permitiram avaliar que o PEP não opera no sentido de promover algum dano à mitocôndria, antes ao contrário reforçaram a proposta de que o EFEITO CRABTREE seja decorrente de uma competição entre essa organela e a piruvato quinase pelo ADP disponível. A alta atividade encontrada para a enzima isolada de extrato livre de células HeLa sustenta esta proposição Orientadores: Maria Benigna Martinelli de Oliveira; Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Ciências (Bioquímica) 1993-01-01T00:00:00Z https://hdl.handle.net/1884/100529 Clonagem, isolamento e caracterização do gene recA de Herbaspirillum seropedicae estirpe z78 Resumo: A partir de um banco genômico de Herbaspirillum seropedicae estirpe Z78, construído no cosmídeo vetor pLAFR3, foi isolado um gene análogo ao recA por complementação interespecífica da estirpe mutante Escherichia coli HB101 (recA). Seis plasmídeos recombinantes "pLAFR3::DNA de H. seropedicae Z78" foram isolados e passaram a constituir a série pBMR1 a pBMR6. O plasmídeo pBMR5 foi escolhido para estudos mais detalhados. Resultados quantitativos de sobrevivência mostraram que este plasmídeo foi capaz de conferir resistência à radiação ultravioleta e ao metanosulfonato de metila (MMS) à estirpe E. coli HB101. Além disto, o plasmídeo pBMR5 restaurou a proficiência de recombinação homóloga após conjugação de E. coli HB101. Estudos de hibridização DNA/DNA revelaram a existência de homologia estrutural entre o gene recA de E. coli K12 e o gene recA de H. seropedicae Z78 contido no plasmídeo pBMR5. O DNA inserto deste plasmídeo apresentou sítios de restrição para as enzimas BamHI, BglII, EcoRI e HindIII. O fragmento HindIII de 3,65 kb que continha o gene recA de H. seropedicae Z78 foi subclonado no vetor pTZ18R dando origem ao plasmídeo pBMR503. Este plasmídeo conferiu à E. coli HB101 níveis de complementação fisiológica iguais àqueles obtidos para pBMR5. Um derivado recA? do plasmídeo pBMR5 foi obtido por inserção do transposon Tn5. Este plasmídeo, denominado pBMR26.2, foi incapaz de restaurar a proficiência de recombinação ou de conferir resistência à radiação ultravioleta ou ao MMS às estirpes HB101 e DH5 de E. coli. Os dados obtidos neste trabalho sugerem fortemente a existência de um gene tipo recA em H. seropedicae Z78, bem como a funcionalidade de um sistema de reparo e recombinação análogo ao Sistema SOS de E. coli. Orientadores: Fabio de Oliveira Pedrosa e Liu Un Rigo; Tese (doutorado) - Universidade Federal do Parana. Setor de Ciencias Biologicas 1994-01-01T00:00:00Z https://hdl.handle.net/1884/100591 Clonagem, caracterização e sequenciamento dos genes nifA e nifB de Herbaspirillum seropedicae A partir de um banco de genes de Herbaspirillum seropedicae construído no cosmídeo vetor pVK102 foi isolado o gene nifA daquele organismo por complementação do mutante FP10 nifA de Azospirillum brasilense. O plasmídeo recombinante pEMS1, contendo o gene nifA de H. seropedicae, foi identificado e caracterizado. Este plasmídeo não complementou os mutantes FP8 e FP9 (ntrC), FP3 (nifHDK) e FP6 (deficiente na produção de proteína MoFe). O fragmento Sal I de 2,0 kb do plasmídeo pEMS1 hibridizou fortemente com o gene nifA de Klebsiella pneumoniae, mas não com os genes nifHDK de A. brasilense. A região que continha o gene nifA de H. seropedicae foi mapeada numa extensão de aproximadamente 2,0 kb do plasmídeo pEMS1 por subclonagem e por hibridização. Nesta região e em suas adjacências foi demonstrado, após sequenciamento, a presença de uma ORF homóloga aos genes nifA de outros organismos e de uma ORF parcial correspondente ao gene nifB de H. seropedicae. A proteína NifA de H. seropedicae deduzida a partir da sequência de nucleotídeos possui alta homologia com outras proteínas NifA nos domínio D e E. Foi identificado ainda um interdomínio homólogo àquele presente nas proteínas NifA de Bradyrhizobium japonicum, Rhizobium spp., Azorhizobium caulinodans. Sítios de ligação para NtrC e NifA e promotores -24/-12 foram identificados na região promotora do gene nifA de H. seropedicae. Após o gene nifA foi identificado também o gene nifB de H. seropedicae. A região N-terminal da proteína NifB de H. seropedicae possui alta homologia com as de B. japonicum e Azotobacter vinelandii. Dois sítios de ligação para NifA e um promotor -24/-12 foram identificados na região promotora do gene nifB de H. seropedicae. Com base nos dados da sequência de nucleotídeos dos gene nifA e nifB de H. seropedicae e nos resultados de fusões nifA::lacZ foi construído um modelo hipotético para a regulação da fixação de nitrogênio em H. seropedicae Orientadores: Fabio de Oliveira Pedrosa, Shigehiro Funayama; Contem 21 fots. coladas; Tese (doutorado) - Universidade Federal do Parana, Setor de Ciencias Biologicas 1990-01-01T00:00:00Z