anterior a 2002, ver Programa de Pós-Graduação em Morfologia https://hdl.handle.net/1884/39610 2026-04-04T04:24:23Z 2026-04-04T04:24:23Z https://hdl.handle.net/1884/98445 2026-03-23T13:28:14Z 2025-01-01T00:00:00Z

Metabolismo energético de carboidratos e de proteínas em Astyanax lacustris submetidos a estresse térmico agudo Resumo: Organismos aquáticos, em especial que habitam rios e pequenos afluentes de águas, estão mais expostos a variações térmicas se comparados a grandes porções hidrográficas, afetando mais facilmente a ictinofauna presente. Como organismos ectotérmicos, a temperatura é o principal fator abiótico que interfere no desenvolvimento de peixes, e mudanças que extrapolam a faixa de temperatura adequada à espécie levam a uma condição de estresse térmico implicando mudanças no equilíbrio de suas atividades bioquímicas, moleculares e fisiológicas. Neste contexto, o estresse térmico sofrido por peixes e sua consequente perda da homeostase, tem repercussão desde a capacidade de ingestão de alimentos até os processos digestivos, a eficiência na absorção de nutrientes e ao estoque do excedente de energia. Com o objetivo de avaliar como uma condição de choque térmico agudo em alta temperatura afeta o metabolismo de carboidratos e proteínas em Astyanax lacustris, o presente trabalho fez uso de método espectrofotométrico para inferir a atividade enzimática de 8 biomarcadores (hexoquinase, lactato desidrogenase, malato desidrogenase, glicose-6-fosfato desidrogenase, citrato sintase, aspartato aminotransferase, alanina aminotransferase, glutamato desidrogenase) do metabolismo energético, amostrados no encéfalo, fígado, músculo e brânquias desse peixe, em 5 tempos de exposição ao estresse térmico ( 2, 6, 12, 24 e 48 horas). O Encéfalo apresentou um aumento da atividade enzimática em todos os biomarcadores analisados, com exceção de alanina aminotransferase, em um primeiro momento. O órgão que teve maior prejuízo em sua atividade metabólica em relação aos respectivos controles foram as brânquias, possivelmente por estar mais exposta ao meio externo e a desnaturalização proteica. Enzimas como lactato desidrogenase e glutamato desidrogenase apresentaram aumento em sua atividade em todos os tempos analisados no fígado quando comparadas aos seus controles em temperatura de aclimatação. Dentre as inúmeras metodologias de inferência da atividade enzimática as baseadas em espectrofotometria são amplamente utilizadas. Baseado nisso este trabalho propôs uma metodologia de otimização do cálculo da atividade enzimática de dados provenientes da leitura de microplacas pelo espectrofotômetro, baseado na seleção do grupo ótimo de leituras respeitando as restrições metodológicas da literatura através do use de sliding window. Foi encontrado diferenças significativas entre o algoritmo proposto e os cálculos manuais para determinação da porção linear da curva de absorbância, no slope resultante e consequentemente na atividade enzimática para as amostras analisadas; Abstract: Aquatic organisms, particularly those inhabiting rivers and small water tributaries, are more exposed to thermal fluctuations compared to those in larger hydrographic systems, which more readily affects the local ichthyofauna. As ectothermic organisms, temperature is the main abiotic factor influencing fish development, and deviations beyond the optimal thermal range for a given species result in thermal stress, leading to disturbances in the balance of their biochemical, molecular, and physiological processes. In this context, thermal stress experienced by fish and the consequent loss of homeostasis can impact a wide range of biological functions, from food intake and digestion to nutrient absorption efficiency and energy storage. With the aim of evaluating how acute high-temperature thermal shock affects carbohydrate and protein metabolism in Astyanax lacustris, this study employed a spectrophotometric method to infer the enzymatic activity of eight biomarkers (hexokinase, lactate dehydrogenase, malate dehydrogenase, glucose-6 phosphate dehydrogenase, citrate synthase, aspartate aminotransferase, alanine aminotransferase, and glutamate dehydrogenase) related to energy metabolism. These were assessed in the brain, liver, muscle, and gills of the fish at five different thermal stress exposure durations (2, 6, 12, 24, and 48 hours). The brain exhibited increased enzymatic activity across all analyzed biomarkers, except for alanine aminotransferase, at the initial stages. The gills showed the most significant impairment in metabolic activity compared to the respective control groups, likely due to their greater exposure to the external environment and consequent protein denaturation. Enzymes such as lactate dehydrogenase and glutamate dehydrogenase exhibited increased activity at all time points in the liver when compared to the control groups maintained at acclimation temperature. Among the various methods for inferring enzymatic activity, spectrophotometric approaches are widely used. Based on this, the present study proposed an optimization methodology for calculating enzymatic activity from microplate readings obtained via spectrophotometry. This method was based on the selection of the optimal set of readings, adhering to methodological constraints reported in the literature, through the use of a sliding window approach. Significant differences were observed between the proposed algorithm and manual calculations in determining the linear portion of the absorbance curve, the resulting slope, and consequently the enzymatic activity of the analyzed samples Orientadora: Profª Drª Lucélia Donatti; Banca: Lucélia Donatti (Presidente da Banca), Katya Naliwaiko e Anselmo Chaves Neto; Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular. Defesa : Curitiba, 01/07/2025; Inclui referências; Área de concentração: Biologia Celular e Molecular

2025-01-01T00:00:00Z https://hdl.handle.net/1884/100977 2026-02-13T17:57:04Z 2022-01-01T00:00:00Z

Obtenção, caracterização e validação de biomoléculas como ferramentas para detecção de desreguladores endócrinos e metais tóxicos em Danio rerio Resumo: Testes baseados em imunoensaios aparecem como técnicas promissoras para avaliação da qualidade da água. Ao nível de expressão das proteínas, a Vitelogenina (VTG) e a Metalotioneína (MT) podem ser usadas como imunosensores para detectar poluentes desreguladores endócrinos estrogênicos e metais tóxicos, respectivamente. O atual estudo busca obter, caracterizar e validar as proteínas nativas VTG e MT do organismo modelo D. rerio e seus respectivos anticorpos específicos. As proteínas nativas foram obtidas por meio da exposição hídrica de exemplares machos e fêmeas aos contaminantes 17a-etinilestradiol (EE2) e cloreto de cádmio (CdCl2) e purificadas por cromatografia líquida. Dentre as estratégias para obter a VTG, a Cromatografia por Troca Iônica (CTI) foi a mais eficiente, pois apresentou maior rendimento e melhor grau de pureza entre as cromatografias testadas. Por sofrer degradação devido a condições desnaturantes, a VTG apresenta um padrão multibanda nas análises de SDS-PAGE e western blot. A proteína, que normalmente possui peso molecular próximo a 130 kDa, apresentou vários domínios com pesos moleculares menores, devido ao processo de fragmentação. A CTI também apresentou ser mais eficiente para purificar a MT, visto que foi possível isolar o que parece ser seus dímeros (isoforma I e II) e oligômero (peso molecular ~150 kDa). Como a MT tem alta propensão em formar agregados, que variam de ~14 kDa até ~150 kDa, também é possível observar o padrão multibandas nas análises de SDS-PAGE e western blot. Em seguida, as proteínas purificadas foram adsorvidas em colunas cromatográficas para imunopurificação de anticorpos IgG específicos, provenientes do soro de coelhos. Os anticorpos purificados foram avaliados por SDS-PAGE, biotinilados e validados frente aos extratos proteicos de D. rerio nos ensaios de ELISA e western blot. As tentativas para purificar a IgG foram mal sucedida devida à baixa afinidade e rendimento dos anticorpos. Não foi possível diferenciar a concentração das proteínas do extrato total entre machos e fêmeas por meio do anti- VTG no ELISA e, pelo western blot, se verificou que o anticorpo apresenta reação cruzada com uma proteína de baixo peso molecular (~40 kDa), presente em ambos os sexos. Já o anti-MT apresentou padrão de afinidade baixo diante da MT purificada e do extrato total. Assim, como alternativa, foi realizada a purificação dos anticorpos IgY da gema do ovo de galinhas. Foi possível separar as proteínas solúveis da gema pelo protocolo de extração, sendo que a Cromatografia por Troca Iônica, seguida por Interação Hidrofóbica, conseguem purificar a IgY com alto grau de pureza. Os resultados com a VTG e MT mostram que ainda são necessários ensaios para verificar a estabilidade físico-químico dessas proteínas, visando compreender o perfil que elas apresentam sob condições de pH, aquecimento, congelamento/descongelamento e presença de agentes redutores. Como alternativa, os anticorpos obtidos a partir da gema do ovo poderia ser uma alternativa viável para identificar essas proteínas no ELISA e western blot; Abstract: Tests based on immunoassays appear as promising techniques for water quality assessment. At the level of protein expression, Vitellogenin (VTG) and Metallothionein (MT) can be used as immunosensors to detect estrogenic endocrine-disrupting pollutants and toxic metals, respectively. The current study seeks to obtain, characterize and validate the native proteins VTG and MT of the model organism D. rerio and their respective specific antibodies. The native proteins were obtained through the water exposure of male and female specimens to the contaminants 17a-ethinylestradiol (EE2) and cadmium chloride (CdCl2) and purified by liquid chromatography. Among the strategies to obtain the VTG, the Ionic Exchange Chromatography (IEX) was the most efficient, as it presented the highest yield and the best degree of purity among the chromatographies tested. As it undergoes degradation due to denaturing conditions, VTG presents a multiband pattern in SDS-PAGE and western blot analyzes. The protein, which normally has a molecular weight close to 130 kDa, has several domains with lower molecular weights, due to the fragmentation process. CTI also proved to be more efficient to purify MT, since it was possible to isolate what appears to be its dimers (isoforms I and II) and oligomer (molecular weight ~150 kDa). As MT has a high propensity to form aggregates, ranging from ~14 kDa to ~150 kDa, it is also possible to observe the multiband pattern in SDS-PAGE and western blot analyses. Then, the purified proteins were adsorbed on chromatographic columns for immunopurification of specific IgG antibodies from rabbit serum. The purified antibodies were evaluated by SDS-PAGE, biotinylated and validated against D. rerio protein extracts in ELISA and western blot assays. Attempts to purify the IgG were unsuccessful due to the low affinity and yield of the antibodies. The anti-VTG did not differentiate the concentration of the protein of the total extract between males and females in the ELISA and, by the western blot, it was verified that the antibody presents a cross reaction with a low molecular weight protein (~40 kDa), present in both the sexes. On the other hand, anti-MT showed a low affinity pattern compared to purified MT and total extract. Thus, as an alternative, the purification of lgY antibodies was carried out from the egg yolk of chicken. It was possible to separate the soluble proteins from the yolk by the extraction protocol, and the Ionic Exchange Chromatography, followed by Hydrophobic Interaction, manage to purify the lgy, with a high degree of purity. The results with VTG and MT show that tests are still needed to verify the physicochemical stability of these proteins, in order to understand the profile they present under pH, heating, freezing/thawing conditions and the presence of reducing agents. Alternatively, antibodies obtained from egg yolk could be a viable alternative to identify these proteins in ELISA and western blot Orientador: Prof. Dr. Marco Antonio Ferreira Randi; Coorientador: Dr. Claudemir de Souza; Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular. Defesa : Curitiba, 04/08/2022; Inclui referências; Área de concentração: Biologia Celular e Molecular

2022-01-01T00:00:00Z https://hdl.handle.net/1884/100755 2026-02-04T13:38:46Z 2024-01-01T00:00:00Z

Avaliação da prevalência e dos fatores de risco da infecção por Sars-Cov2 e outros patógenos de origem zoonótica em pessoas em situação de rua e seus contactantes Resumo: Pessoas em situação de rua estão em condição de alta vulnerabilidade social, econômica e sanitária. Sua condição de vida causa além de uma alta mortalidade, uma morbidade maior para diversas doeças e agravos, comparando com a população geral. Com isso esse trabalho levantou a preocupação e o questionamento sobre a exposição à patógenos de origem zoonótica para essa população e seus contactantes. Para avaliar prevalências e fatores de risco de zoonoses nessa população foram desenvolvidos três artigos: o artigo do Capítulo 1, denominado ":High SARS-CoV-2 seroprevalence in persons experiencing homelessness and shelter workers from a day-shelter in São Paulo, Brazil" investigou a prevalência e os fatores de risco para SARS-CoV-2 em pessoas em situação de rua que frequentam um centro comunitário e funcionários desse local. Foi realizado uma coleta de material biológico e questionário epidemiológico em um Centro comunitário em agosto de 2020 na cidade de São Paulo. Essas amostras coletadas foram enviadas para laboratório e processadas, realizando teste RT-PCR e ELISA para SARS-CoV-2. Todas as amostras de swab foram negativas por RT- qPCR. A soropositividade IgG foi de 111/203 (54,7%) em pessoas em situação de rua, 41/87 (47,1%) em funcionários, respetivamente. Os fatores de risco foram foram "idade acima de 30 anos" para pessoas em situação de rua e "auto-declaração como não-branco" e perda de olfato e paladar" para os funcionários. Já a variavel "ter cão como animal de companhia foi um fator de proteção para pessoasem situação de rua. O Capítulo 2 também usou as mesmas amostras coletadas em 2020, mas para avaliar a soroprevalência de Toxocara spp. na mesma população. Com isso o resultado da prevalência foi de 89/194 (45,9%,) em pessoas em situação de rua e 22/79 (27.8%, 95% CI: 19.2–38.6) em funcionários. Ter um grau universitário foi o único fator de proteção para a infeção por Toxocara spp.. O terceiro e último capítulo apresenta o artigo: "One health approach on serosurvey of anti-Leptospira spp.. in homeless persons and their dogs in South Brazil", que diferente dos anteriores avaliou amostras coletadas em três cidades (São Paulo, Curitiba e Foz do Iguaçu). Um total de 200 amostras humanas e 75 de cães foram testadas para anticorpo anti- Leptospira spp. Nenhuma amostra humana foi positiva, enquanto 5 (6,7%) dos cães foram positivos. Os três trabalhos também levantaram o perfil sociodemográfico da população avaliada que indicou dados semelhantes a outros trabalhos que também avaliam essa população, mostrando que a maior parte dessas pessoas são homens com idade entre 20 e 50 anos, se auto-declaram pretos ou pardos e que possuem baixa escolaridade. Portanto, o conjunto de artigos que compõe este trabalho, demonstra que as pessoas em situação de rua e os funconários do centro de acolhimento aqui avaliadas, estão mais expostas à transmissão de COVID-19 do que a população geral. Essas duas populações também tiveram contato com o Toxocara spp., indicando relação com sua vulnerabilidade socioambiental. Já o convívio com cães não foi um fator de risco para a transmissão da leptospirose e o resultado negativo em todas as amostras supostamente pode ser explicado por uma característica comportamental de constante migração, evitando assim o contato com enchentes e alagamentos. Essa tese aponta a vulnerabilidade de pessoas em situação de rua diante da exposição à patógenos de origem zoonotica, mostrando a importância e necessidade de uma maior atenção para com essa população; Abstract: Homeless people are highly vulnerable in social, economic and health terms. Their living conditions cause not only high mortality but also higher morbidity from various diseases and illnesses compared to the general population. As a result, this study has raised concerns and questions about exposure to pathogens of zoonotic origin for this population and their contacts. Three articles were developed to assess the prevalence and risk factors for zoonoses in this population: the article in Chapter 1, entitled ":High SARS-CoV-2 seroprevalence in persons experiencing homelessness and shelter workers from a day-shelter in São Paulo, Brazil" investigated the prevalence and risk factors for SARS-CoV-2 in homeless people who attend a community center and employees of this place. A collection of biological material and an epidemiological questionnaire were carried out at a community center in August 2020 in the city of São Paulo. These collected samples were sent to the laboratory and processed, performing RT-PCR and ELISA tests for SARS-CoV-2. All swab samples were negative by RT-qPCR. IgG seropositivity was 111/203 (54.7%) in homeless people, 41/87 (47.1%) in employees, respectively. The risk factors were "age over 30" for homeless people and "self-declaration as non-white" and "loss of smell and taste" for employees. The variable "having a dog as a companion animal" was a protective factor for homeless people. Chapter 2 also used the same samples collected in 2020, but to assess the seroprevalence of Toxocara spp. in the same population. This resulted in a prevalence of 89/194 (45.9%,) in homeless people and 22/79 (27.8%, 95% CI: 19.2-38.6) in employees. Having a university degree was the only protective factor for Toxocara spp. infection. The third and final chapter presents the article: "One health approach on serosurvey of anti-Leptospira spp. in homeless persons and their dogs in South Brazil", which, unlike the previous ones, evaluated samples collected in three cities (São Paulo, Curitiba and Foz do Iguaçu). A total of 200 human and 75 dog samples were tested for anti-Leptospira spp. antibodies. No human samples were positive, while 5 (6.7%) of the dogs were positive.The three studies also looked at the sociodemographic profile of the population evaluated, which showed similar data to other studies that also evaluate this population, showing that most of these people are men aged between 20 and 50, self-declare themselves black or brown and have low levels of education. Therefore, the set of articles that make up this study shows that the homeless people and shelter workers evaluated here are more exposed to COVID-19 transmission than the general population. These two populations also had contact with Toxocara spp., indicating a relationship with their socio-environmental vulnerability. Living with dogs, on the other hand, was not a risk factor for leptospirosis transmission and the negative result in all the samples can supposedly be explained by a behavioral characteristic of constant Orientador: Prof Alexander Welker Biondo; Banca: Alexander Welker Biondo (Presidente da Banca), Carlos Eduardo Coradassi, Ivan Roque de Barros Filho, Haroldo Greca Junior e Raphael Rolim de Moura; Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular. Defesa : Curitiba, 27/11/2024; Inclui referências; Área de concentração: Biologia Celular e Molecular

2024-01-01T00:00:00Z https://hdl.handle.net/1884/100249 2026-01-14T18:59:36Z 2000-01-01T00:00:00Z

Estudo do mecanismo de recrutamento de mastocitos para sitios perifericos Resumo: Os grànuios citoplasmáticos dos mastócitos contêm inúmeras substâncias que, quando liberadas, participam das respostas alérgicas e inflamatórias. A liberação de tais substâncias está relacionada com o estímulo dos mastócitos, que ocorre quando os receptores de alta afinidade (FC sR I) para imunoglobulina E (IgE) são interligados ou, também, de maneira independente dos FCeRI, através da ação de substâncias como o composto 48/80, que causa a desgranuiação dos mastócitos de forma não-citotóxica. A lise dos mastócitos pela água destilada causa a liberação apenas dos mediadores pré- formados contidos nos grânulos dos mastócitos, tais como a histamina, a heparina, o fator quimiotático para eosinófilos na anafilaxia (EC F-A ) e proteases. A desgranuiação causada pela anti-IgE ou pelo composto 48/80, além destes fatores, também libera os mediadores neo-formados, como os leucotrienos, prostaglandinas e citocinas. O s m ecanism os de diferenciação e crescimento dos mastócitos e de seus precursores são determinados pela ação de fatores de crescimento e outras interleucinas, porém, não se conhece exatamente quais os fatores que estão envolvidos no recrutamento dos mastócitos da medula óssea. Para investigar se os mediadores químicos pré-formados e neo-formados liberados pelos mastócitos participam do processo de recrutamento destas células da medula óssea, ratos foram injetados intraperitonealmente com água destilada, que causa lise dos mastócitos, com anti-IgE e com o composto 48/80, que causam a desgranuiação dos mastócitos de forma dose-dependente. O s mastócitos da medula ó ssea foram isolados com esferas magnéticas conjugadas ao mAb BGD6, específico para mastócitos. A população de mastócitos da medula ó ssea obtida de animais controle varia entre 2,38% e 2,5%. A diminuição da população de mastócitos da medula ó ssea observada 48 horas após a injeção intraperitoneal de água destilada, anti-IgE e composto 48/80, ocorre de maneira equivalente nos três tratamentos: 0,6%; 0,75% e 0,41%, respectivamente. Animais também foram injetados com o fator estimulador de colônias de granulócito (G -C S F) e o fator estimulador de colônias de granulócito/macrófago (G M -CSF), os quais não provocaram desgranuiação dos mastócitos peritoneais e não promoveram redução na população de mastócitos da medula óssea. O G -C S F promoveu um aumento da população de mastócitos da medula ó ssea (5,48%) e induziu o aparecimento de mastócitos imaturos no mesentério. O G M -C SF não alterou a população de mastócitos da medula óssea, que manteve o mesmo número de células encontrado nos controles. O s resultados sugerem que os compostos pré-formados liberados pelos mastócitos são suficientes para recrutar estas células e seus precursores da medula óssea; Summary: Mast celi cytoplasmic granules contain numerous substances íhat when released participate in ailergic and inflammatory responses. Mast cell granuies may be released when the mast cells are activated by cross-linking of the high affinity IgE receptor (FCsRI), or in an FCeRI independent manner by substances such as Compound 48/80 that cause the non-cytoxic degranulation of mast cells. The lysis of mast cells by distilled water results in the release of only the preformed mediators such as histamine, heparin, chemotactic factor for eosinophils in anaphalaxis (EC F-A ) and proteases. W hen mast cells are degranulated by anti-IgE or by Compound 48/80, in addition to releasing the pre-formed factors, the cells also release newly formed mediators such as leukotrienes, prostaglandins and cytokines. Although the growth and differentiation of mast cells and their precursors are controlled by the action of growth factors and other interleukines, it is not know exactly which factors are involved in the recruitment of mast cells from the bone marrow to peripheral sites. In order to investigate whether the pre-formed or newly formed mediators released by mast cells play a role in the recruitment of mast cells from the bone marrow, rats were injected mtraperitoneally with distilled water which lyses the mast cells or with anti-IgE or with Compound 48/80 both of which degranulate the mast cells in a dose dependent fashion. Mast cells were isolated from the bone marrow by immunomagnetic isolation using magnetic beads conjugated with the mast cell specific antibody mAb BGD6. In control animais, between 2.38% and 2.5% of the cells in the bone marrow were mast cells. Intraperitoneal injection with distilled water, anti-IgE or Compound 48/80, ali resulted in a similar diminution (0.6%; 0.75% and 0.41% ) of mast cells in the bone marrow. Animais were also injected with two growth factors, granulocyte colony-stimulating factor (G -C S F) and granulocyte/macrophage-colony stimulating factor (G M -CSF) that do not stimulate mast cell degranulation. No reduction in the number of mast cells in the bone marrow w as observed with either factor. However, intraperitoneal exposure to G -C S F cau ses an increase in the number of mast cells in the bone marrow (5.48% ) and increased the number of immature mast cells in the mesentery. After exposure to G M -C SF, the number of mast cells seen in the bone marrow and in the mesentery was the sam e as that seen in control animais. Our results suggest that the pre-formed mediators released by mast cells are sufficient to recruit mast cells and their precursors from the bone marrow Orientadora: Maria Celia Jamur; Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Parana, Setor de Ciencias Biologicas

2000-01-01T00:00:00Z