Estudo da taxa de hidroxiprolina tecidual nos diversos segmentos do canal alimentar normal do cão pelo método fotocolorimétrico utilizando o reativo de Ehrlich

Abstract

Resumo: O presente estudo objetiva determinar a taxa de hidroxiprolina tecidual normal, presente em diversos segmentos do canal alimentar de cães. Para a determinação bioquímica da hidroxiprolina, utilizou-se a técnica proposta por KIVIRIKKO e cols. (1967) e modificada por IBBOTT (1974). O procedimento experimental constou da retirada e armazenamento de fragmentos teciduais de diversos segmentos do canal alimentar de oito cães. Os fragmentos foram recortados conforme um tamanho padrão, constituindo assim as amostras teciduais para o estudo. As amostras teciduais foram pesadas e submetidas a uma hidrólise ácida, sendo que em seguida, os hidrolisados teciduais foram processadas bioquimicamente para a determinação da taxa de hidroxiprolina tecidual. Em paralelo aos hidrolisados teciduais, foram processadas diversas soluções padrão de trabalho de hidroxiprolina (com quantidades conhecidas de hidroxiprolina) e soluções brancas (com ausência absoluta de hidroxiprolina), ambas para permitir uma análise comparativa entre os resultados obtidos pelos hidrolisados teciduais. Finalmente, realizou-se a leitura da absorbância espectrofotométrica das amostras e a determinação final da taxa de hidroxiprolina dos hidrolisados teciduais. A análise dos resultados obtidos a partir das soluções-padrão de trabalho de hidroxiprolina (36, 18, 9 e 4,5 µg/ml) apresentou alta correlação (r=0,9875), demonstrando assim a sensibilidade da técnica. A concentração média de hidroxiprolina presente nas amostras teciduais foi de 6,298 mg/g para o esôfago cervical; 8,688 mg/g para o esôfago torácico; 6,385 mg/g para o estômago; 2,187 mg/g para o duodeno; 3,716 mg/g para o jejuno-ílio; 6,154 mg/g para o colo transverso; 7,289 mg/g para o colo sigmóide; e 8,253 mg/g para o reto. Não encontrou-se correlação entre a taxa de hidroxiprolina tecidual presente nos segmentos do canal alimentar dos cães estudados, em relação ao seu peso corpóreo.

Abstract: The aim of the present study, was to determine the normal tissue hydroxyprolin rate, of the various segments of the dog’s alimentary canal. The technique used for the biochemical determination of hydroxyprolin, was the one described by KIVIRIKKO et. all. (1967), and modified by IBBOTT (1974). The steps of the experiment were: a) Tissue samples of different segments of the alimentary canal of eight dogs were obtained and stored in saline solution at -20ºC. b) The samples were re-cutted in a standardized size, dried with absorbent paper, weighed, and hydrolized with 6N HCl and oxidized with chloramine-T. The final color reaction was done with Ehrlich’s reagent, c) Different hydroxyprolin standard and while solutions were also processed. d) The final hydroxyprolin rate present in the hydrolyzed tissue samples was determined by spectrophotometry. The high sensibility of the technique was demonstrated by the correlation rate (r = 0.9875) obtained within the hydroxyprolin standards. The mean hydroxyprolin rate obtained for each of the studied segments was: 6.298 mg/g in the cervical esophagus, 8.688 mg/g in the thoracic esophagus, 6.385 mg/g in the stomach, 2.187 mg/g in the duodenum, 3.716 mg/g in the jejuno-ileum, 6.154 mg/g in the transverse colon, 7.289 mg/g in the sigmoid colon and 8.253 in the rectum. There was no correlation between the tissue hydroxyprolin rate of the different segments of the dog’s alimentary canal and the body weight.