Alterações estruturais do sarcoma 180 tratado com a alfa-D-glucana do líquen Ramalina celastri

Abstract

Resumo: Estudos anteriores demonstraram que polissacarídeos do líquen Ramalina celastri são responsáveis pela inibição parcial ou total do Sarcoma 180 (S-180). Objetivamos com este trabalho avaliar sob ponto de vista histológico e imunohistoquímico as células deste tumor após o tratamento com a a-D-glucana extraída deste líquen. O modelo tumoral foi inoculado subcutaneamente em camundongos albinos suiços fêmeas. Após 24 horas, iniciou-se o tratamento. A cada 7 dias, durante 5 semanas, os tumores eram medidos e fixados em Líquido de Bouin e emblocados em parafina histológica. Foram utilizadas metodologias de coloração para microscopia de luz e para a imunohistoquímica os cortes foram incubados com anticorpos policlonais que reconhecem FN e LN e detectados com anticorpo secundário complexado com peroxidase. O estudo estatístico mostrou inibição do crescimento tumoral e diminuição do volume tumoral médio ao longo dos 35 dias nos animais tratados com a a-Dglucana. Observou-se vasos sangüíneos neoformados e infiltrado inflamatório, sendo mais intenso nos animais tratados, sugerindo um papel estimulante do sistema de defesa para a substância, mecanismo que ainda não foi totalmente esclarecido. Figuras sugestivas de apoptose foram encontradas nos animais tratados, o que já havia sido relatado por outros autores que utilizaram esta glucana em células HeLa. Com relação à imunomarcação, os cortes se apresentaram negativos para LN, sugerindo uma provável natureza não epitelial, visto que ainda há dúvidas sobre o tecido de origem destas células. Com relação a FN, observou-se positividade em todos os cortes. Nos tumores controle, a marcação foi mais intensa entre as células tumorais sugerindo ação na adesão destas células, enquanto que nos tratados, a marcação ocorreu no tecido conjuntivo adjacente, sugerindo ação na migração de células de defesa, provavelmente induzida pelo polissacarídeo.

Abstract: Previous studies demonstrated that the polysaccharide of the Lichen Ramalina celastri is responsible for partial or total inhibition of Sarcoma 180 (S-180). We aimed in this work to evaluate under a histological and an immunohistochemical point of view, the cells of this tumor after the treatment with a-D-glucana extracted from this lichen. The tumoral model was subcutanously inoculated in Swiss albino female mice. After 24 hours, we iniciated the treatement. Every 7th day, for 5 weeks, the tumors were measured and the animals were sacrificed. The tumors were fixed in Liquid of Bouin and embedded in paraffin. Staining methodologies were used and for the immunohistochemical, the tumors were incubated with polyclonais antibodies against FN and LN and developed with a secondary antibody conjugated with peroxidase. Statistical study showed significant results in inhibition of the tumoral growth and decreasing tumor mass after 35 days with a-D-glucan treatment. It was observed neovascularization and infiltrated inflammatory, what was more intense in thea-D-glucan treated groups, suggesting a stimulating role in the defense system for this substance. Suggestive apoptosis bodies were found in the treated groups, what had already been told by other authors that used this glucan in HeLa cells culture model. Related to the mmunohistochemistry, the control and treated tumors were negative for LN, suggesting a probable non epitelial nature, because there are still doubts on the origin of S-180. FN was expressed in all groups. In the control groups, there were more intense FN expression margin tumors cells, suggesting the action of this molecule in these cells adhesion. While in the treated groups, the FN in connective tissue appeared more intense, suggesting to FN playing a role as an important for inflamatory cells adhesion and migration, probably induced by the polysaccharide treatment.