Caracterização química, atividade antifúngica, sinérgica e toxicológica de Eugenia pyriformis Cambess., Myrtaceae

Abstract

Resumo: A espécie Eugenia pyriformis Cambess., Myrtaceae, é conhecida popularmente como uvaia, uvalha-do-campo ou uvalha. Esta espécie possui poucos estudos anteriores e têm mostrado que extratos e frações obtidos de caule e folhas apresentam habilidade de inibir o crescimento in vitro de bactérias e fungos. O objetivo deste estudo foi avaliar a composição fitoquímica, investigar a atividade antifúngica, sinérgica e a toxicidade do óleo essencial, dos extratos, das frações e compostos isolados de Eugenia pyriformis. O estudo foi realizado a partir do caule, das folhas e dos frutos, onde verificou-se os parâmetros físicos-químicos, além da avaliação nutricional e da capacidade antioxidante da casca e da polpa do fruto. O material foi seco e armazenado para a preparação dos extratos brutos cetônico e etanólico em aparelho de soxhlet. Os extratos brutos foram particionados obtendo-se as frações hexano, clorofórmio, acetato de etila e hidroalcoólica remanescente. Foram identificados através de ressonância magnética nuclear cinco compostos, sendo eles na fração hexano o p-sitosterol e o campesterol, na fração acetato de etila o ácido gálico e no extrato cetônico primário, a a- e p-amirinas. Realizou-se também a extração do óleo essencial a partir das folhas secas, pelo método de hidrodestilação e, os compostos majoritários identificados foram p-cariofileno, biciclogermacreno, globulol e õ-cadineno. A atividade antifúngica foi avaliada pelas técnicas da microdiluição em caldo para a determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) contra cepas de Candida abicans ATCC 40175, Candida krusei ATCC 40147, Candida parapsilosis ATCC 40038, Aspergillus flavus ATCC 204304, Trychophyton mentagrophytes ATCC 9533 e contra 10 isolados clínicos de C. albicans. A análise da atividade antifúngica contra fungos leveduriformes demonstrou um bom potencial inibitório para os extratos brutos e as frações acetato de etila e hidroalcoólica obtidos a partir da extração cetônica e etanólica do caule e das folhas com CIMs de 7,81 pg/mL e inferiores a 7,81 pg/mL para as cepas testadas. A avaliação do potencial antifúngico contra T. mentagrophytes mostrou bom potencial inibitório observado no extrato cetônico bruto de caule e nas frações cetônica e etanólica acetato de etila de caule e folhas com CIMs oscilando entre 7,81 e 62,5 pg/mL. O estudo contra isolados clínicos de C. albicans mostrou eficiente atividade da fração etanólica acetato de etila de folhas (FEAEF) sobre as cepas testadas, com valores de CIMs entre 3,9 e 62,5 pg/mL. O estudo do potencial sinérgico foi realizado pela técnica Time Kill onde foi possível observar que a FEAEF assim como o Fluconazol, apresentaram atividade fungistática. Pela técnica Checkerboard houve interação de aditividade na associação de Fluconazol com FEAEF frente a C. albicans, com valor de FICI de 1,49. Na avaliação da atividade citotóxica pelas metodologias de A. salina, atividade hemolítica e no estudo da viabilidade de células-tronco mesenquimais os resultados sugerem baixa toxicidade. Os resultados encontrados incentivam a continuação da pesquisa com E. pyriformis, pois estes dados podem ser considerados promissores na busca e desenvolvimento de novos fármacos antifúngicos.

Abstract: The species Eugenia pyriformis Cambess., Myrtaceae, is popularly known as uvaia, uvalha-do-campo or uvalha. This species has few previous studies and has shown that extracts and fractions obtained from stem and leaves have the ability to inhibit in vitro growth of bacteria and fungi. The objective of this study was to evaluate the phytochemical composition, to investigate the antifungal and synergistic activities and, toxicity of the essential oil, extracts, fractions and isolates compounds of Eugenia pyriformis. The study was carried out from the stem, leaves and fruits, where the physical-chemical parameters were verified, as well as the nutritional evaluation and the antioxidant capacity of the fruit peel and pulp. The material was dried and stored for the preparation of plant extracts in soxhlet apparatus. The ketone and ethanolic extracts were partitioned to give the hexane, chloroform, ethyl acetate and residual hydroalcohol fractions. Five compounds were identified by means of nuclear magnetic resonance, hexane fraction, p-sitosterol and campesterol, in the ethyl acetate fraction, gallic acid and in the primary ketone extract, a- and pamyrin. The essential oil was extracted from the dried leaves obtained by hydrodistillation, and the major compounds identified were p-caryophyllene, bicyclogermacrene, globulol and 5-cadinene. The antimicrobial activity was evaluated by broth microdilution techniques for the determination of Minimum Inhibitory Concentration (MIC) against strains of Candida abicans ATCC 40175, Candida krusei ATCC 40147, Candida parapsilosis ATCC 40038, Aspergillus flavus ATCC 204304, Trychophyton mentagrophytes ATCC 9533 and against 10 clinical isolates of C. albicans. The analysis of the antifungal activity against yeast fungi demonstrated a good inhibitory potential for the crude extracts and the ethyl acetate and hydroalcohol fractions obtained from the ketonic and ethanolic extraction of the stem and the leaves showed MIC of 7.81 pg/mL and less than to 7.81 pg/mL for the strains tested. The evaluation of the antifungal potential against T. mentagrophytes showed good inhibitory potential observed in the crude ketone extract of stem and in the ketone and ethanolic fractions of ethyl acetate of stem and leaves with MIC ranging from 7.81 to 62.5 pg/mL. The study of clinical strains of C. albicans showed efficient activity of ethanolic ethyl acetato fraction of leaves (EEAFL) on the strains tested, with MIC values between 3.9 and 62.5 pg/mL. The study of the synergistic potential was performed by the Time Kill technique, where it was possible to observe that EEAFL as well as Fluconazol had fungistatic activity. By the Checkerboard technique, there was interaction of additivity in the association of Fluconazole with EEAFL versus C. albicans, with FICI value of 1.49. In the evaluation of the cytotoxic activity by the methods of A. salina, hemolytic activity and in the study of the viability of mesenchymal stem cells the results suggest low toxicity. The results found encourage the continuation of the research with E. pyriformis, since these data can be considered promising in the search and development of new antifungal drugs.