Desenvolvimento e validação de método indicativo de estabilidade do dasabuvir por cromatografia líquida (CLAE-DAD) e investigação dos produtos de degradação

Abstract

Resumo: Introdução: Dasabuvir (DBV) é um fármaco utilizado no tratamento da hepatite C. Sua ação deve-se a inibição da NS5B polimerase, enzima responsável pela replicação viral. A eficácia e segurança de um medicamento está diretamente relacionada com a sua estabilidade. A perda da estabilidade pode levar a subdose além de ocasionar o aparecimento de produtos de degradação (PD), que podem ser tóxicos para o paciente. Por esse motivo os estudos de estabilidade são determinantes na avaliação da qualidade de um medicamento. Um método indicativo de estabilidade para um medicamento é um método capaz de identificar e quantificar o fármaco na presença de seus PD na forma farmacêutica. O objetivo deste estudo foi obter o perfil de degradação do DBV, assim como desenvolver e validar um método indicativo de estabilidade e a elucidação estrutural dos produtos de degradação detectados. Método: DBV foi submetido a condições de estresse ácida, alcalina, oxidativa, fotolítica e termal a fim de obter seu perfil de degradação. O método cromatográfico foi desenvolvido em cromatógrafo à líquido de alta eficiência acoplada à detector de arranjo de diodo (CLAEDAD). Diferentes condições cromatográficas foram testadas tais como: composição e pH da fase móvel, fluxo, temperatura e comprimento de onda de detecção, com intuito de otimizar a separação do DBV na presença dos PD. O método otimizado foi validado de acordo com a RDC 166/17 (ANVISA). A possível estrutura dos PD foi determinada com base nas análises por CLUE-qTOF. Resultados: DBV mostrou-se sensível à degradação ácida e alcalina. Ao todo, seis PD foram detectados. A condição cromatográfica adequada para a separação e quantificação do analito foi obtida utilizando uma coluna Symmetry® C18 (4,6x75 mm, 3,5 ?m); como fase móvel, ácido fórmico 0,1%:acetonitrila (55:45, v/v) ; em fluxo de 1 mL.min-1 e detecção de 244 nm. Com base no perfil de fragmentação e massa exata obtidos nos experimentos da espectrometria de massas, duas estruturas foram propostas para os produtos de degradação alcalina: [3-terc-butil-5-(6-metanosulfonamidonaftaleno-2-il)-4- metoxifenil]uréia e N-[6-(5-amino-3-terc-butil-2-metoxifenil)naftaleno-2-il]metano sulfonamida. Conclusões: O método indicativo de estabilidade para o DBV desenvolvido e validado mostrou-se adequado para a quantificação do fármaco na presença de seus produtos de degradação, sendo possível até então propor estruturas para dois produtos de degradação.

Abstract: Introduction: Dasabuvir (DBV) is a drug used on the treatment of the hepatitis C virus infection, acting on the inhibitiion of NS5B polymerase, enzyme responsible for viral replication. Efficacy and safety of a medicine is directly related with the maintenance of its stability. Besides of subtherapeutical dose, the loss of stability causes the appearance of degradation products (DP), which may imply in toxicity to the patient, making the stability studies crucial to evaluate the quality of the medicine. This study proposes to obtain the degradation profile of DBV, developing and validating a stabilityindicating method to monitorate DBV among its degradation products and impurities, elucidating the degradation structures. Methods: DBV underwent stress degradation conditions, such as acidic, alkaline, oxidative, photolytic and thermal to obtain its degradation profile. The chromatographic development was perfomed using a HPLCDAD system (Agilent, 1100 series). Differents chromatographics conditions was tested, such as: mobile phase composition and pH, flow, temperature, wavelength detection, aiming to achieve the separation of DBV in the presence of DPs. The method was validated accordingly RDC 166/17 (ANVISA). The structural elucidation of DPs was perfomed using a UPLC-QToF-MS system (Waters, Acquity H-class). Results: DBV has shown to be sensitive to acidic and alkaline medium, in total six degradation products were detected. The optimal separation was achieved using Symmetry® C18 (4.6x75mm, 3.5?m) column. Formic acid 0.1%:Acetonitrile (55:45, v/v) as mobile phase, at flow of 1 ml/min and 244 nm wavelength detection. Based on the fragmentation profile and exact mass, result of MS analysis, it was possible to propose two degradation structures from alkaline medium: [3??tert??butyl??5??(6??methanesulfonamidonaphthalen??2?? yl)??4??methoxyphenyl]urea and N??[6??(5??amino??3??tert??butyl??2??methoxyphenyl)naphthalen?? 2??yl]methanesulfonamide. Conclusion: The stability-indicating method for DBV was developed and validated, showing to be suitable for the determination of the drug among its degradation products, being possible until now to propose two new degradation structures.