Avaliação da participação da Prostaglandina - E2 na resposta anti-inflamatória do extrato de Malva sylvestris

Abstract

Resumo: A Malva sylvestris e uma planta tradicionalmente utilizada como alternativa para terapias anti-inflamatorias ha varios seculos. E relatada como capaz de reduzir edemas e aliviar a dor, sendo indicada principalmente contra afeccoes de boca e garganta, como nas dores de dente e inflamacoes de gengiva. Dessa forma, possui uso potencial na odontologia contra a periodontite, uma doenca de alta prevalencia e que pode levar a perda do dente. Apesar do uso disseminado desta planta, pouca informacao se tem a respeito de seu mecanismo de acao. Modelos de estudo in vitro de periodontite utilizam celulas derivadas da linhagem U937, as quais liberam PGE2, um mediador quimico que apresenta alta incidencia em tecidos inflamados. Este trabalho teve como objetivo desenvolver e validar um metodo de deteccao e quantificacao de PGE2 por CLAE-EM/EM, que foi utilizado na avaliacao do efeito do extrato de M. sylvestris sobre a liberacao do mediador por celulas derivadas de monocitos U937. A matriz de validacao utilizada foi o sobrenadante de um meio de cultivo que permaneceu 24 horas em contato com as celulas utilizadas no estudo. As analises foram conduzidas em um sistema CLAE 1200 AgilentR acoplado a um espectrometro de massas API 3200 Applied BiosystemsR, utilizando coluna XBridgeTM WatersR (C18, 5 ƒÊm, 150 x 2,1 mm). A validacao do metodo mostrou excelente linearidade (r = 0.9984) para a curva de calibracao, abrangendo concentracoes de 5,0 a 500 ng/mL de PGE2. Taxas de recuperacao do analito do meio de cultivo alcancaram valores superiores a 63%, valor considerado excelente tendo em vista a complexidade da matriz. A repetibilidade e a precisao intermediaria do metodo foram consideradas adequadas, sendo encontrados valores de coeficiente de variacao inferiores a 3,38% e 6,23%, respectivamente. A exatidao do metodo permaneceu dentro dos parametros aceitaveis pela RE ANVISA No 899/03, que preconiza variacoes maximas de 15%. O estudo de estabilidade da PGE2 sob varias condicoes de estresse mostrou que amostras contendo o analito se mantem estaveis por no maximo 12 horas, quando nao submetidas ao congelamento. Na avaliacao in vitro do seu potencial anti-inflamatorio, a M. sylvestris se mostrou capaz de reduzir em 10,74 } 2,86% as taxas de liberacao de PGE2, quando o agente estimulante da liberacao deste mediador da inflamacao era a desferroxamina (400 ƒÊM).

Abstract: The Malva sylvestris is a plant traditionally used as an alternative to anti-inflammatory therapies for centuries. It is reported to be able to reduce swelling and relieve pain and indicated mainly against diseases of the mouth and throat, as in toothache and gum inflammation. Thus, it has potential use in dentistry against periodontitis, a disease of high prevalence, which can lead to tooth loss. Despite the widespread use of this plant, we have little information about its mechanism of action. In vitro study models of periodontitis using cells derived from strain U937, which release PGE2, a chemical mediator of inflammation that has high incidence in inflamed tissues. This study aimed to develop and validate a method for detection and quantification of PGE2 by CLAE-EM/EM, which was used in evaluating the effect of extracts of M. sylvestris on the release of the inflammatory mediator PGE2 by monocyte-derived U937 cells. The matrix of validation used was the supernatant of a culture medium that remained 24 hours in contact with the cells used in the study. Analyses were conducted on an Agilent® 1200 HPLC system coupled to an spectrometer Applied Biosystems® API 3200, using Waters® XBridgeTM column (C18, 5 ìm, 150 x 2.1 mm). The validation of the method showed excellent linearity (r = 0.9984) for the calibration curve, with concentrations ranging from 5.0 to 500 ng/mL of PGE2. Recovery rates of the analyte from the medium reached values above 63%, which is considered excellent in view of the complexity of the matrix. The repeatability and intermediate precision of the method were considered adequate, found values of coefficient of variation less than 3.38% and 6.23% respectively. The accuracy of the method remained within acceptable parameters by RE ANVISA N. 899/03, which calls for maximum variation of 15%. The stability study of PGE2 under various stress conditions showed that samples containing the analyte are stable for up to 12 hours, when not subject to freezing. In vitro evaluation of potential anti-inflammatory, the M. sylvestris has been shown to reduce by 10.74 ± 2.86% rates of release of PGE2, when the agent stimulating the release of this inflammation mediator was deferoxamine (400 ìM). Key-