Identificação de genes de Phaseolus vulgaris diferencialmente expressos durante a interação com as estirpes mutantes rhcN e nopJ de Rhizobium sp. NGR234

Abstract

Resumo : Rhizobium sp. NGR234 é um microorganismo fixador de nitrogênio, capaz de responder a estímulos químicos fornecidos por plantas leguminosas. Tal resposta faz com que se estabeleçam relações simbióticas entre a planta e a bactéria, culminando na formação de nódulos radiculares fixadores de nitrogênio. O Sistema de Secreção Tipo III é um dos fatores essenciais para a formação dos nódulos simbióticos em linhagens de rizóbios. Nestes, o TTSS transporta uma ampla variedade de proteínas (Nop e Rhc), tanto para o meio extracelular, quanto para o citoplasma das células eucarióticas, influenciando o processo de infecção para a nodulação. NGR234 secreta pelo menos oito proteínas de maneira dependente de TTSS. Quando abolida a secreção destas proteínas, a formação dos nódulos pode ser afetada de diferentes maneiras: inibir a formação, reduzir ou aumentá-la. O gene rhcNcodifica uma proteína com características de ATPase, responsável por fornecer energia ao aparato de secreção. Plantas de espécies diferentes manifestam fenótipos diferentes quando inoculadas com este mutante. Outro exemplo é que mutações sítio dirigidas nas seqüências conservadas de aminoácidos no gene nopJproduz uma estirpe que induz maior nodulação na planta em relação ao selvagem. Após o cultivo de Phaseolus vulgaris e posterior inoculação com a estirpe selvagem e os mutantes rchcNe nopJde Rhizobium sp. NGR234 observou-se maior eficiência na capacidade de nodulação pelas estirpes rchcNe nopJ- . Posteriormente foi extraído o RNA total dos nódulos simbióticos e produziu-se cDNA, com o qual foram realizadas reações de PCR, para identificar a existência de genes diferencialmente expressos entre as três linhagens. Após o estabelecimento das condições ideais de PCR para a investigação foi possível observar um padrão de bandas diferenciais entre as três estirpes, concluindo-se que a estratégia utilizada é eficiente para o objetivo. Os fragmentos amplificados diferencialmente serão clonados e seqüenciados para posterior investigação de suas funções.