Constituintes químicos e atividade citotóxica de Salvia lachnnostachys (Lamiaceae)

Abstract

Resumo: A família Lamiaceae (200 gêneros e 3000 espécies) está representada no Brasil por 47 gêneros e 518 espécies. Salvia é um dos maiores gêneros da família, compreendendo cerca de 1000 espécies, mas no Brasil abrange apenas 60 espécies. Salvia lachnostachys Benth é uma espécie endêmica do Brasil, de hábito herbáceo, encontrada principalmente na Mata Atlântica do Sul e Sudeste do país. Um estudo químico preliminar dessa espécie relatou o isolamento de triterpenos, como os ácidos ursólico e oleanólico, e do diterpeno fruticulina A. O extrato etanólico de S. lachnostachys apresentou atividade ansiolítica em camundongos e atividade antiinflamatória. Visando contribuir para o conhecimento químico e biológico desta espécie, o presente trabalho descreve o estudo fitoquímico das folhas de S. lachnostachys guiado por ensaios de atividade citotóxica contra linhagens de células humanas. As folhas secas e moídas foram extraídas com solventes (hexano e etanol) e o extrato etanólico foi fracionado através de técnicas cromatográficas. Diversos métodos espectroscópicos como UV-Vis, RMN e EM, foram utilizados para identificação das substâncias isoladas. Os ensaios de atividade citotóxica foram realizados com extratos brutos, frações e substâncias puras. Foi utilizado o método da sulforrodamina B e várias linhagens de células tumorais humanas, incluindo glioma, mama, ovário resistente, rim, pulmão, leucemia, cólon (apenas para extratos e frações), ovário (substâncias puras) e próstata (substâncias puras). A linhagem de célula normal de queratinócito foi utilizada em todos os ensaios. O extrato em hexano foi inativo, enquanto que o extrato em etanol apresentou atividade, inibindo o crescimento de todas as linhagens de células avaliadas. A concentração para inibição do crescimento de 50% das células (GI50) variou entre 25,0-44,0 ?g mL-1. O extrato etanólico foi fracionado por cromatografia líquida a vácuo, eluída com hexano, hexano:CH2Cl2 1:1, CH2Cl2, acetona e metanol, rendendo cinco frações. Todas as frações foram ativas, sendo a maior atividade detectada na fração eluída com hexano. O estudo fitoquímico das frações eluídas com hexano e hexano:CH2Cl2 1:1 levou ao isolamento de 10 substâncias: fruticulina A (SL1), isofruticulina A (SL2), 7,20-diidrofruticulina A (SL3), fruticulina B (SL4), 20- hidroxifruticulina B (SL5), lachnostachyona (SL6), ácido oleanólico (SL7), ácido ursólico (SL8), uvaol (SL9) e eritrodiol (SL10). As substâncias SL2, SL5 e SL6 são inéditas. As substâncias SL1 e SL2 apresentaram atividade citotóxica semelhante. Ambas inibiram o crescimento das células de todas as linhagens de células testadas, com exceção da linhagem de leucemia, com GI50 = 3,7-7,4 ?mol L-1. SL4 apresentou menor atividade, pois não inibiu o crescimento das linhagens de células de ovário resistente a múltiplos fármacos, e inibiu o crescimento das demais linhagens com GI50 = 16,4-37,1 ?mol L-1. As outras substâncias isoladas não foram testadas.

Abstract: The Lamiaceae family (150 genera and 3000 species) is represented in Brazil by 47 genera and 518 species. Salvia is one of the largest genus of the family, comprising about 1000 species, but with only 60 species in Brazil. Salvia lachnostachys Benth is an endemic species of Brazil, with herbaceous habit, found mainly in the Atlantic Forest of South and Southeast regions of the country. In previous chemical study triterpenes, such as ursolic and oleanolic acids, and the diterpene fruticuline A were reported from this species. Ethanolic extract of S. lachnostachys displayed anxiolytic and anti-inflammatory activities in mice. Aiming to contribute to the chemical and biological knowledge of this species, this work describes the phytochemical study of S. lachnostachys leaves guided by cytotoxic assays against human cell lines. Dried and powdered leaves were extracted with solvents (hexane and ethanol), and the ethanolic extract was fractionated by chromatographic techniques. Several spectroscopic methods, such as UV-Vis, NMR and MS were used to identify the isolated compounds. The cytotoxicity of crude extracts, fractions and pure compounds was evaluated. It is used the sulforhodamine B method and a panel of human tumor cell lines, including glioma, breast, ovarian-resistant, kidney, lung, leukemia, colon (extracts and fractions only), ovarian (pure compounds) and prostate (pure compounds) cell lines. Keratinocyte, no cancer cell line, was also used in all assays. The hexane extract was inactive, while the ethanolic extract was active against all tested cell lines. The concentration needed to inhibit 50% of growth (GI50) was 25.0 - 44.0 ?g mL-1. The ethanol extract was fractionated by vaccum liquid chromatography eluted with hexane, hexane:CH2Cl2 1:1, CH2Cl2, acetone and methanol, yielding five fractions. All fractions were active, but the most activity was observed in the fraction eluted with hexane. The phytochemical study of fractions eluted with hexane and hexane:CH2Cl2 1:1 led to the isolation of 10 compounds: fruticuline A (SL1), isofruticuline A (SL2), 7,20-dihydrofruticuline A (SL3), fruticuline B (SL4), 20-hydroxyfruticuline B (SL5), lachnostachyone (SL6), oleanolic acid (SL7), ursolic acid (SL8), uvaol (SL9) and erythrodiol (SL10). Compounds SL2, SL5 and SL6 are new. Compounds SL1 and SL2 showed similar activity. Both inhibited the growth of all tested cell lines, with exception of leukemia cell lines, with GI50 = 3.7-7.4 ?mol L-1. SL4 was less active, because it did not inhibit the growth of ovarian-resistant cell lines, and caused growth inhibition of remaining cell lines with GI50 = 16.4-37.1 ?mol L-1). The other isolated compounds were not tested. Key words: Lamiaceae, Salvia lachnostachys, triterpenes, diterpenes, cytotoxicity activity.