Microextração em fase líquida com fibra oca na determinação de fármacos inibidores da bomba de prótons em amostras de plasma humano por cromatografia líquida e detecção espectrofotométrica

Abstract

Resumo: No presente estudo foi realizada a determinação de três fármacos da classe dos inibidores da bomba de prótons (IBP), omeprazol, pantoprazol e lansoprazol, em amostras de plasma humano utilizando a técnica HF-LPME com análise por cromatografia líquida com detecção por arranjo de diodos (LC-DAD). As condições cromatográficas estabelecidas permitiram a separação dos analitos com resolução satisfatória e tempo de corrida de 10 minutos utilizando a fase móvel composta por tampão fosfato pH 5 0,010 mol L-1 e acetonitrila (60:40, v/v) na vazão de 1 mL min-1 nos comprimentos de onda de 285 e 302 nm. A otimização dos parâmetros da HFLPME foi crucial para a determinação dos fármacos sendo que as condições selecionadas foram o modo de extração em 3 fases com segmentos de 8 cm de fibra, solvente 1-octanol, fase doadora tampão fosfato pH 5 0,010 mol L-1 e fase aceptora tampão borato pH 10 0,010 mol L-1, velocidade de agitação de 750 rpm, tempo de agitação de 15 minutos e adição de NaCl de 5% (m/v). A avaliação dos parâmetros analíticos de mérito, segundo recomendações do US-FDA, possibilitou observar boa linearidade (200 a 2000 ng mL-1) para todos os analitos com coeficiente de determinação de 0,9937; 0,9921 e 0,9910 para os fármacos omeprazol, pantoprazol e lansoprazol, respectivamente. A precisão foi avaliada em termos de precisão intra (300, 900 e 1200 ng mL-1) e interdia (200, 1000 e 2000 ng mL-1) com coeficientes de variação (CV%) inferiores a 15% para todas as concentrações e limite inferior de quantificação (LOQ) de 200 ng mL-1. A exatidão também foi avaliada nesses níveis de concentração com valores na faixa 80 a 130%. Por fim, a eficácia do método HF-LPME/LC-DAD foi verificada em amostras reais de plasma humano de pacientes em terapia com os analitos, sendo possível a quantificação dos analitos omeprazol e pantoprazol em concentrações por volta de 1,2 e 1,9 ?g mL-1, respectivamente. Desta forma, é possível confirmar a aplicabilidade do método proposto para determinação dos fármacos IBP em amostras de plasma humano com satisfatória etapa de "clean up", além de seletividade, exatidão e precisão. Palavras-chave: inibidores da bomba de prótons; HF-LPME; plasma humano.

Abstract: In this study, three drugs of the proton pump inhibitor class (PPI), omeprazole, pantoprazole and lansoprazole, were determined in human plasma samples using the HF-LPME technique by liquid chromatography with diode array detection (LC- DAD). The chromatographic conditions allowed separation of the analytes with satisfactory resolution and run time of 10 minutes, using the mobile phase composed of phosphate buffer at pH 5 (0.010 mol L-1) and acetonitrile (60:40, v/v) with flow of 1 mL min-1 at wavelengths of 285 and 302 nm. The optimization of HF-LPME parameters was crucial for the determination of the drugs, and the conditions selected were the 3 phase mode with 8 cm fiber segments, 1-octanol as solvent, donor phase phosphate buffer at pH 5 (0.010 mol L-1) and acceptor phase borate buffer at pH 10 (0.010 mol L-1), stirring speed of 750 rpm, stirring time of 15 minutes, and addition of 5% NaCl (w/v). The method validation, according to US-FDA recommendations, showed good linear range (200 to 2000 ng mL-1) for all analytes with determination coefficient of 0.9937; 0.9922 and 0.9910 for omeprazole, pantoprazole and lansoprazole, respectively. The precision was evaluated in terms of intra-day (300, 900 and 1200 ng mL-1) and inter-day (200, 1000 and 2000 ng mL-1) with relative standard deviations (RSD) lower than 15% for all the concentrations, with limit of quantification (LOQ) of 200 ng mL-1. Accuracy was also assessed at these concentration levels and ranged from 80 to 130%. Finally, the efficacy of the HF-LPME / LC-DAD method was verified in real human plasma samples from patients in therapy with the analytes, being possible the quantification of the drugs omeprazole and pantoprazole at concentrations around 1200 and 1900 ng mL-1, respectively. Therefore, it is possible to confirm the applicability of this proposed method for determination of PPI drugs in human plasma with satisfactory clean up step, selectivity, accuracy and precision. Key-words: proton pump inhibitors; HF-LPME; human plasma.