Variabilidade alotípica do fator B do sistema complemento em pacientes com doença celíaca e familiares. Associaçao com a gravidade da doença e a presença de outros auto-anticorpos

Abstract

Resumo: A via alternativa do complemento tem uma importante participação na patogênese da doença celíaca (DC) e o Fator B (BF) um papel central na ativação dessa via. A DC consiste em uma enteropatia por sensibilidade ao glúten e resulta de uma complexa interação entre fatores genéticos, imunológicos e ambientais. Neste estudo avaliou-se a variabilidade alotípica de BF em pacientes com DC e familiares, visando determinar a associação com a susceptibilidade e gravidade da doença, e com a presença de autoanticorpos. Foram estudados 76 pacientes celíacos, não relacionados (569, 20d; 2-77 anos) e 150 familiares de 47 desses pacientes (879, 63c?; 2-75 anos). O grupo controle incluiu 97 indivíduos sadios (679, 30c?; 1-71 anos). Os alótipos de BF foram determinados através de eletroforese em gel de agarose, sob alta voltagem e refrigeração constante, seguida de imunofixação com anticorpo anti-BF humano. A associação com a gravidade da doença foi avaliada através dos títulos dos anticorpos antiendomísio (EmAIgA) e das alterações histológicas da mucosa entérica. Os anticorpos EmA-IgA, anti músculo liso, mitocondrial, microssomal de fígado e rim, nuclear, célula gástrica parietal e microssomal tireiodeano foram detectados por imunofluorescência indireta. Os resultados obtidos não mostraram diferença significante na distribuição dos fenótipos e alelos de BF entre os pacientes celíacos e os controles, embora um aumento (T) significativo de BF S (p=0,001) e diminuição ( i ) de BF SF (p=0,002) e do alelo BF*F (p=0,0003) foram observados nos familiares quando comparados aos controles. Essas associações também foram observadas nas mulheres das famílias de celíacos, quando comparadas às da população normal ( t BF S: p=0,0048, l BF SF: p=0,0041; i BF*F: p=0,0022). A comparação entre os pacientes e familiares evidenciou diminuição significante de BF S (p=0,026) e tendência ao aumento de BF SF (p=0,065) nos pacientes. A diminuição de BF S foi significante apenas nos pacientes do sexo feminino em relação às familiares (p=0,023). O EmA-IgA foi detectado em 100% dos pacientes em uso de glúten e 13,3% (20/150) dos familiares. Os títulos do EmA-IgA e o grau de lesão das biópsias, nas amostras coletadas simultaneamente, apresentaram uma alta correlação (r=0,80388; p<0,00001). A análise das variantes de BF não caracterizou associação com a gravidade da DC. Embora 18,42% dos pacientes (p=0,012) e 12% dos familiares (p=0,097) apresentassem positividade para algum dos auto-anticorpos testados, comparados com 6,18% dos controles, não ocorreu associação com as variantes de BF e a presença desses anticorpos. Uma diminuição na freqüência de BF*F foi observada nos pacientes com auto-anticorpos (p=0,044), quando comparada à dos controles, sugerindo um papel protetor desse alelo nos pacientes quanto ao desenvolvimento de autoanticorpos, mais especificamente os antinucleares (p=0,047). Concluindo, os resultados obtidos demonstram diferenças na expressão do polimorfismo de BF entre familiares de celíacos e controles. As diferenças observadas entre pacientes e familiares sugerem o alótipo BF SF como marcador de susceptibilidade e BF S como de proteção à doença em famílias de celíacos da população brasileira.

Abstract: The alternative pathway of complement plays an important role in the pathogenesis of celiac disease (CD), where factor B (BF) is central to its activation. CD is a glutensensitive enteropathy which results from a complex interplay between genetic, immunologic and environmental factors. In this study the allotypic variability of BF has been determined in CD patients and their relatives, with the aim to evaluate its association with the susceptibility and disease severity, and with the presence of autoantibodies. Seventy-six non-related patients (569 and 20c?; age range 2-77 years) and 150 relatives of 47 patients (879 and 63d; age range 2-75 years) were investigated. As controls, 97 healthy individuals were included (679 and 30d, age range 1-71 years). The BF allotypes were determined by high-voltage agarose gel electrophoresis, followed by immunofixation with anti-human BF antibody. The association with the disease severity was evaluated by antiendomisial antibody (EmA-IgA) titers and histological findings of intestinal mucosa. The EmA-IgA, smooth muscle, mitochondrial, liver-kidney microsomal, nuclear, gastric parietal cells and thyroid microsome antibodies were tested by indirect immunofluorescence. No significative differences were observed in the distribution of BF phenotypes and alleles amongst the CD patients and the control group, although a significant increase ( t ) of BF S (p=0,001) and a decrease (I) of BF SF (p=0,002) and of the allele BF*F (p=0,0003) were observed in the relatives when compared to the controls. Corresponding associations were also observed in the females relatives, when compared to the females of the control group (tBF S: p=0,0048; iBF SF: p=0,0041; iBF*F: p =0,0022). A significant decrease in BF S (p=0,026) and an increasing tendency in BF SF variant (p=0,065) were observed in CD patients when compared to their relatives. The decrease of BF S was significant only in the female patients in relation to their female relatives (p=0,023). EmA-IgA was detected in a 100% of the celiac patients ingesting gluten, and in 13,3% (20/150) of the relatives. The EmA-IgA titers and the histological alterations showed a high correlation (r=0,80388; p<0,00001) in samples collected simultaneously. No association was found between BF variants and CD severity. Although 18,42% of patients (p=0,012) and 12,0% of relatives (p=0,097) were positive for some autoantibodies evaluated, compared with 6,18% of controls, there was no association between BF variants and these autoantibodies. A decrease in the frequency of BF*F in celiac patients with autoantibodies, when compared with controls (p=0,044), was observed, suggesting a protective role of this allele in the development of autoantibodies in patients, particularly antinuclear antibodies (p=0,047). In conclusion, differences in the expression of BF polymorphism were observed between the relatives of celiac patients and the healthy population. The differences observed between patients and their relatives suggest BF SF as a CD susceptibility marker, and BF S as a protection marker of the disease among the CD families in the Brazilian population.