Estudo de exames laboratoriais para diagnóstico e acompanhamento de esferocitose hereditária

Abstract

Resumo: Esferocitose hereditária (HS) é a doença hemolítica por defeito de membrana eritrocitária de maior incidência (1:2.000-3.000) em países europeus e é caracterizada pela redução das espectrinas, banda 3, anquirinas ou proteínas 4.1 ou 4.2. Atualmente seu diagnóstico se fundamenta em: aumento da fragilidade osmótica (FO) e da fragilidade osmótica incubada (FOi); redução do tempo de lise em glicerol acidificado (AGLT); diminuição ou ausência de ?-espectrina, ?-espectrina, banda 3 ou de proteínas 4.1 e 4.2 em eletroforese de proteínas de membrana em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE); pesquisa de proteínas de membrana em citômetro de fluxo, empregando-se eosina 5-maleimida (EMA) como marcador e criohemólise aumentada. Este trabalho teve como objetivo comparar exames empregados no diagnóstico de esferocitose hereditária e identificar qual(is) deles são mais adequados ao diagnóstico. Foram obtidas 18 amostras de sangue de crianças atendidas no Ambulatório de Hematopediatria do Hospital de Clínicas da Universidade Federal do Paraná. No estudo dos dados coletados foram identificados dados como gênero, feminino (8) e masculino(10); histórico familiar de HS das mães de 4 dos pacientes, presuntivamente diagnosticadas com esferocitose hereditária, FO e FOi aumentada em 7 e 8 pacientes (n=10) respectivamente, 7 casos de anemia moderada (8 a 11 gHb/dl) e 2 de anemia moderadamente severa (6 a 8 gHb/dl) (n=9). Nos ensaios realizados observou-se: FO com resultados acima da faixa de referência em 6 amostras (37,5%), FOi com resultados superiores à faixa de referência em 11 amostras (68,8%), AGLT com tempos reduzidos em 16 casos (94%). No SDS-PAGE observou-se 17 casos de diminuição da expressão de ?-espectrina; 13 de diminuição de ?-espectrina; 12, de banda 3; 1, de proteína 4.1 e 2 casos de redução de proteína 4.2, nas 18 amostras. Observou-se presença de esferócitos nas amostras analisadas pela quantificação das formas eritrocitárias ao microscópio óptico, variando de 3 a 20% (n=8). Comparando-se os resultados de redução de ?-espectrina com AGLT houve concordância de 87,4%; com FO de 37,5% e com FOi de 62,5%. Quanto à redução de ?-espectrina houve concordância de 87,5% com os resultados de AGLT ; de 37,5% com FO e de 68,8% com FOi. Para a redução de banda 3, houve concordância de 75% com AGLT; de 32,5% com FO e de 56,2 com FOi. Comparando-se os resultados de FO com AGLT, houve concordância de 40% e com FOi de 66,6%. Na comparação entre FOi e AGLT, obteve-se concordância de 73,3%. Na comparação dos resultados de % de esferócitos com FO, FOi e AGLT a maior concordância foi com AGLT, 87,5%. A partir dos resultados obtidos neste estudo pode-se sugerir que a associação de AGLT e FOi pode representar a escolha mais confiável, por detectar maior número de casos com diagnóstico presuntivo de HS além de apresentar um custo acessível. A inclusão de SDS-PAGE, porém deve ser considerada, tendo em vista que detecta a redução ou ausência de proteínas e pode ser útil em casos não detectados pelo EMA, AGLT ou FOi. Palavras-chaves: Esferocitose hereditária. Diagnóstico. Membrana eritrocitária. Hemólise

Abstract: Hereditary spherocytosis (HS) is the hemolytic disease due to defects in the erythrocyte membrane of higher incidence (1: 2000-3000) in European countries and is characterized by lower spectrin, band 3, ankyrins or proteins 4.1 or 4.2. Currently diagnosis is based on: increased osmotic fragility (FO) and incubated osmotic fragility (FOi); reduction in lysis time in acidified glycerol (AGLT); decrease or absence of ?-spectrin, ?-spectrin, band 3 protein or 4.1 and 4.2 on electrophoresis of membrane proteins in polyacrylamide gel (SDS-PAGE); study of membrane proteins in a flow cytometric, using Eosin 5-maleimide (EMA) as a marker and increased criohemolysis. This study aimed to compare employees tests in the diagnosis of hereditary spherocytosis and identify which one (s) of them are best suited to the diagnosis. We obtained blood samples from 18 children treated at Hematopediatrics ambulatory of Clinic Hospital of the Federal University of Paraná . In the study of data collected data such as gender were identified, female (8) and male (10); family history of HS mothers 4 patients, presumptively diagnosed with hereditary spherocytosis, FO and FOi was increased on 7 and 8 patients (n = 10) respectively, 7 cases of moderate anemia (8 to 11 gHb / dl) and 2 anemia moderately severe (6 to 8 gHb / dL) (n = 9). In tests performed it was observed: FO with results above the normal range in 6 samples (37,5%) FOi was superior results with the normal range in 11 samples (68,8%), AGLT with reduced time in 16 cases (94%) . In SDS-PAGE it was observed in 17 cases decreased expression of ?-spectrin; 13 ?-spectrin decreased; 12 band 3; 4.1 1 protein; 2 protein and reduction case 4.2 in 18 samples. Spherocytes was observated in all samples analyzed by quantification of erythrocyte forms an optical microscope, ranging from 3 to 20% (n = 8). Comparing the results of ?-spectrin reduction with AGLT, there was agreement of 87,4%; with FO, 37.5% and FOi was 62.5%. As for the reduction of ?-espectrin, was obtained agreement of 87.5% concordance with the results of AGLT, 37,5% with FO; and, of 68,8%, with FOi. To reduce band 3, there was 75% agreement with AGLT; FO with 37.4%; and 56.2 with FOi. Comparing the results of FO with AGLT, there was agreement of 40% and was 66,6% with FOi. Comparing FOi and AGLT was obtained agreement of 73,3%. In comparing the results of % of spherocytes with FO, FOi and AGLT, the highest agreement was with AGLT 87.5%. From the data obtained suggest that AGLT and FOi association may represent the most reliable choice for detecting more cases with presumptive diagnosis of HS and presents an affordable cost. The inclusion of SDS-PAGE, however, must be considered in order to detect the reduction or absense protein and may be useful in cases not detected by the EMA, FOi or AGLT. Keywords: Hereditary spherocytosis. Diagnosis. Erythrocyte membrane. Hemolysis