Isolamento in vitro de Neospora caninum e toxoplasma gondii do sêmen de cães naturalmente infectados

Abstract

Resumo: Neospora caninum e Toxoplasma gondii são protozoários que infectam vários animais. O DNA dos parasitos foi detectado no sêmen de bovinos e homens, respectivamente, mas não há comprovação da presença desses protozoários no sêmen de cão. O cão pode ser um transmissor assintomático dos protozoários. O presente estudo aborda no capítulo I uma revisão de literatura sobre a Neosporose e Toxoplasmose, com ênfase nas vias de transmissão e o impacto na reprodução canina, e no capítulo II a investigação dos protozoários Neospora caninum e Toxoplasma gondii em amostras de sêmen de cães naturalmente infectados por análise citológica, isolamento em cultivo celular e reação da cadeia em polimerase (PCR). Neste trabalho foram realizadas colheitas de sêmen de 11 cães clinicamente saudáveis (quatro cães soropositivos para N. caninum, cinco soropositivos para T. gondii, dois soropositivos para ambos e dois soronegativos) para realizar o isolamento in vitro. Os isolados obtidos em cultivo celular e amostras do sêmen in natura foram submetidos à amplificação por PCR utilizando iniciadores que delimitam o segmento do DNA da região Nc5 de N. caninum (Np6/Np21) e da região de 529 pb repetida 200 a 300 vezes no genoma do T. gondii (TOX4/TOX5). Foram obtidos dois isolados de N. caninum e cinco de T. gondii confirmados pela PCR. Obteve-se amplificação do DNA de N. caninum em quatro amostras de sêmen, e amplificação do DNA de T. gondii somente nos isolados. Os parasitas estão presentes no sêmen e o isolamento e manutenção em cultivo celular comprovou sua viabilidade.

Abstract: Neospora caninum and Toxoplasma gondii are protozoa that infect many animals. The DNA of parasites was detected in the semen of cattle and men, respectively, but there is no evidence of the presence of these protozoa in dog semen. The dog may be an asymptomatic protozoan transmitter. The chapter I of the present study provides a literature review about neosporosis and toxoplasmosis, with emphasis on routes of transmission and the impact on canine reproduction, and the chapter II brings the investigation of the protozoa Neospora caninum and Toxoplasma gondii in semen samples of dogs naturally infected by cytological analysis, isolation in cell culture and polymerase chain reaction (PCR). In this study semen were collected in 11 clinically healthy dog (four dogs seropositive for N. caninum, five seropositive for T. gondii, two seropositive for both and two seronegative) to perform the isolation in vitro. The strains obtained in cell culture and the samples of nature semen was submitted to PCR amplification using primers that define the Nc5 DNA sequence of N. caninum (Np6/Np21) and the 529 bp repeated 200 to 300 times the genome of T. gondii (TOX4/TOX5). There was obtained two strains of N. caninum and five strains of T. gondii confirmed by PCR. Was obtained four amplification of N. caninum DNA in semen samples and five amplification of T. gondii DNA only in isolated strains. The parasites are present in the semen and the isolation and maintenance in cell culture have proven their viability.