Deteçao de produtos reativos intermediários de oxigenio em macrófagos tratados com o medicamento homeopático método Canova®

Abstract

Resumo : O organismo humano é constantemente ameaçado pela invasão de vários tipos de microrganismos. Para combater essas infecções foi desenvolvido um sistema imune dedicado especificamente a eliminar qualquer invasor. Macrófagos são células do sistema imune que possuem várias funções, incluindo a fagocitose através da qual um invasor é ingerido, morto e digerido. Depois de englobados, a maioria dos microrganismos é morta rapidamente utilizando moléculas tóxicas, algumas derivadas de oxigénio e outras não. Para isso o oxigénio molecular é reduzido a anion superóxido (O2'), via NAD(P)H oxidase. O O2' pode ser convertido a peróxido de hidrogénio (H2O2) ou, antes disso, se combinar com óxido nítrico formando nitrato. Experimentos anteriores em nosso laboratório comprovaram que macrófagos tratados com o medicamento homeopático Método Canova® apresentam-se ativados. Visando detectar a atividade da enzima NAD(P)H oxidase através de marcações eletrondensas, foi realizado experimento in vitro, onde macrófagos peritoneais de camundongos foram cultivados durante 48 horas. No grupo tratado foram adicionados 10% de Método Canova® após duas horas de cultivo em estufa à 37°C 5% CO2 e após 24 horas mais 1%. Seguiu-se então 0 protocolo para NAD(P)H oxidase. Após a incubação as células foram processadas para microscopia eletrônica de transmissão, ultramicrotomadas e observadas sem contrastação no Microscópio Eletrônico de Transmissão Jeol 1200 EXII do Centro de Microscopia Eletrônica da UFPR. A mensuração da produção de H2O2 baseia-se na oxidação dependente de peroxidase do vermelho de fenol pela H2O2. Os animais utilizados para esses ensaios foram tratados in vivo durante sete dias, com doses subcutâneas de 0,2 ml de cada substância testada. A produção do reativo intermediário de oxigénio por macrófagos tratados com o Método Canova® foi determinada segundo o método descrito por PICK & MIZEL (1981). A leitura da produção foi feita em leitor de ELISA utilizando filtro com comprimento de onda de 620 nm. Os resultados foram analisados estatisticamente através da análise de variância (ANOVA: fator duplo sem repetição) e do teste de Tukey. As células tratadas mostraram reação eletrondensa positiva mais intensa para a enzima NAD(P)H oxidase quando comparadas com as do grupo controle. No grupo controle da enzima não foi observado marcação, confirmando a especificidade dessa. Os macrófagos tratados com o medicamento homeopático Método Canova® não sofreram alterações estatisticamente significativas na produção de H2O2 nos tempo analisados, na ausência de moléculas patógenas.