Caracterização das proteínas ZFP11, ZFP29 e ZFPTTP em Trypanosoma cruzi

Abstract

Resumo : O Trypanosoma cruzi apresenta um ciclo complexo na natureza envolvendo pelo menos quatro estágios distintos de desenvolvimento e dois hospedeiros intermediários. A alternância de tipos funcionalmente e morfologicamente distintos implica que genes distintos são expressos pelos diferentes estágios de diferenciação durante o ciclo de vida do parasita. Os mecanismos envolvidos na regulação da expressão de genes em tripanossomatídeos ainda permanecem desconhecidos em sua extensão. O fato de que promotores para RNA polimerase II ainda não tenham sido funcionalmente caracterizados em tripanossomatídeos e o fato da transcrição de mRNAs ser essencialmente policistrônica, com o posterior processamento dos transcritos primários por "trans-splicing", indica que a regulação da expressão gênica ocorra principalmente, se não exclusivamente, por mecanismos pós-transcricionais. Assim, os mecanismos de regulação podem ocorrer em nível do processamento do transcrito primário, em nível do transporte dos transcritos processados do núcleo para o citoplasma, em nível da estabilidade dos transcritos ou ao nível da seleção das sequências a serem traduzidas. Resultados descritos na literatura mostram que proteínas com dedos de zinco tipo CCCH interagem especificamente com regiões de mRNAs podendo modular sua expressão interferindo com a estabilidade dos mRNAs. Diferentes proteínas com este domínio CCCH foram recentemente evidenciadas através de análise do genoma de T. cruzi, dentre essas as proteínas ZFP11, ZFP29 e ZFPTTP que foram estudadas nesse projeto. Os genes codificadores dessas três proteínas foram amplificados a partir do DNA genômico de T. cruzi, clonados e expressos utilizando a plataforma Gateway® e sistema de expressão heteróloga, e as proteínas recombinantes obtidas foram purificadas e inoculadas em camundongos para obtenção de anticorpos policlonais específicos para realizar os imunoensaios de localização celular e análise do padrão de expressão ao longo do ciclo de vida do parasita. Até o presente momento foram obtidos anticorpos específicos contra as proteínas ZFP29 e ZFPTTP o que permitiu realizar as análises de imunolocalização em epimastigotas e do padrão de expressão ao longo do ciclo de vida do parasita. Os resultados mostram que ZFP29 e ZFPTTP apresentam-se localizadas no citoplasma num padrão granular disperso e possuem um padrão de expressão diferenciado no decorrer do ciclo de vida, sendo sua expressão aumentada em epimastigotas.