Efeitos do medicamento homeopático canova no sistema endossomal/lisossomal e corpos lipídicos de macrófagos

Abstract

Canova é um medicamento homeopático que vem sendo utilizado com sucesso no tratamento de doenças onde o sistema imune encontra-se deprimido, sem ter sido detectado toxicidade e efeitos colaterais. Estudos recentes demonstraram que este medicamento atua em macrófagos, aumentando sua capacidade fagocítica e de espraiamento, mudando sua morfologia, distribuição de receptores e secreção de citocinas, sugerindo a ativação destas células. Este trabalho avalia os efeitos do medicamento Canova no metabolismo de macrófagos peritoneais de camundongo, a distribuição de seus corpos lipídicos e sua atuação no sistema endossoma/lisossoma. Em todos os experimentos, macrófagos residentes foram coletados da cavidade peritoneal de camundongos suíços albinos e cultivados por 48 horas. O tratamento com Canova foi feito in vivo ou in vitro. Após a cultura as células foram processadas segundo protocolo e objetivo. Análises citoquímicas foram realizadas para a detecção das enzimas fosfatase ácida, TRAP, Mg++ATPase e corpos lipídicos. A fosfatase ácida e a TRAP foram observadas em microscopia eletrônica de transmissão e microscopia de luz, enquanto que a Mg++ATPase somente em microscopia eletrônica de transmissão. Os corpos lipídicos foram observados pela técnica citoquímica ultraestrutural ósmio-imidazol e pela coloração com Vermelho Nilo em microscopia confocal. Os experimentos para detecção de corpos lipídicos, fosfatase ácida e TRAP foram também realizados na presença de Saccharomyces cerevisiae. Nestes experimentos, após 48 de cultura, as leveduras foram adicionadas ao meio na proporção 10:1 durante 2 horas, para posterior processamento e observação. Como resultado, as enzimas fosfatase ácida e Mg++ATPase apresentaram um aumento de sua atividade nos macrófagos tratados com Canova, quando comparados com os controles. Grande parte das vesículas marcadas para fosfatase ácida foram também marcadas pela reação citoquímica para Mg++ATPase, apresentando as mesmas características morfológicas e localização. A marcação para fosfatase ácida ocorre em praticamente todo o sistema endossomal/lisossomal. Os resultados mostram que parte dos endossomas marcados para fosfatase ácida também apresentam marcação para Mg++ATPase, o que sugere diferenças funcionais entre esses compartimentos e um aumento da atividade do sistema endossomal/lisossomal de maneira geral. Em contrapartida, foi observada uma diminuição na atividade da enzima TRAP e na quantidade de corpos lipídicos de macrófagos tratados com Canova, interagindo ou não com leveduras. A diminuição de lipídios deve estar relacionada com a necessidade de maior produção de membranas por essas células que se encontram muito ativadas. Podem-se observar corpos lipídicos geralmente com muito retículo e mitocôndrias ao seu redor, sendo encontrados principalmente na periferia celular e no interior de vesículas citoplasmáticas. Quando macrófagos interagiram com as leveduras foram observados corpos lipídicos também no interior de fagossomas. A maior atividade do sistema endossomal/ lisossomal de macrófagos tratados com Canova demonstra que este tratamento pode ser um grande potencializador da capacidade fagocítica destas células. Palavras-chave: Canova, fosfatase ácida, TRAP, Mg++ATPase, corpos lipídicos

Canova is a brazilian homeopathic medication that has been successfully used as an immune modulator in diseases where the immune system is depressed. It was detected neither side effects nor toxicity. Recent experiments showed that it acts on macrophages enhancing their phagocytic ability and spread capacity, changing morphology, receptors distribution and cytokines secretion, suggesting an activation process of these cells. This study evaluates the effects of Canova on metabolism of mouse peritoneal macrophages, the distribution of their lipid bodies and their endocytic pathway. For all assays, resident macrophages were collected from Swiss mouse peritoneal cavities and cultured in Eagle's medium. The cells were treated with Canova in vivo or in vitro. Cells were processed according to their appropriate protocol and objective. Cytochemical assays were performed for acid phosphatase, TRAP (tartrate-resistant acid phosphatase), Mg++ATPase and lipid bodies detection. Acid phosphatase and TRAP were observed in light and transmission electron microscopy, Mg++ATPase only in transmission electron microscopy. Lipid bodies were observed by imidazole-buffered osmium tetroxide ultraestructural cytochemistry technique and by Nile Red stain in confocal microscopy. Lipid body, acid phosphatase and TRAP experiments were verified also in the presence of Saccharomyces cerevisiae. In these experiments after 48 hours of growth, macrophages were allowed to interact with microorganisms at a ratio of 10:1 during 2 hours, then processed and examined. As results, acid phosphatase and Mg++ATPase enzymes showed more intense electrodense reaction product in macrophages treated with Canova when compared with controls. Acid phosphatase stain was observed in almost all endosomal/lysosomal system. Mg++ATPase reaction product was found in vesicles having the same morphology and localization of those stained for acid phosphatase. This result suggests that Canova acts enhancing endosomal/lysosomal system activities. In contrast of this augment, TRAP and lipid bodies decreased in Canova treated groups. This decrease happens either when we have macrophages-yeasts interaction. Lipid bodies were founded frequently inside or around cytoplasmic vacuoles, near mitochondria and reticulum enriched regions, in both treated and controls groups. Confocal microscopy shows a decrease in the number of this organels in in vitro treated macrophages. In the presence of yeasts, lipid bodies appear also in fagosomes. Canova treated cells higher endosomal/lysosomal activity shows that this treatment can be a great enhancer of the phagocytic ability.