Efeitos de extratos do gênero Passiflora sobre a atividade de Tirosinase

Abstract

Resumo: A melanina é o principal pigmento que protege a pele contra a radiação ultravioleta. Quando em excesso, a melanina produz eritema, sardas e hiperpigmentação. Entre as enzimas envolvidas na melanogênese, a tirosinase é a mais importante. O gênero Passiflora possui como substâncias majoritárias os flavonoides C-glicosilados, compostos polifenólicos. Os polifenóis representam o maior grupo de inibidores da tirosinase. Assim, o objetivo deste trabalho foi caracterizar os efeitos dos extratos preparados de folhas de P. alata, P. edulis, P. actinia e P. incarnata sobre a atividade de tirosinase purificada de Agaricus bisporus e, também, daquela obtida de células B16F10. Usando o ensaio do MTT como teste de citotoxicidade, estabeleceu-se que a maior concentração não tóxica dos extratos foi de 100 ?g/mL, a qual foi utilizada para o estudo da atividade de tirosinase in vitro. Apenas os extratos de P. alata e de P. edulis apresentaram efeito inibitório significativo sobre a tirosinase de cogumelo (p<0,01) e a murina (P. alata = p<0,01 e P. edulis = p<0,05). Para se estudar o perfil inibitório desses extratos, os efeitos de concentrações crescentes de inibidores clássicos da enzima, como o ácido kójico (AK) e a hidroquinona (HQ), foram comparados aos exercidos pelos extratos de P. alata e P. edulis em sistemas usando a L-DOPA como substrato. Enquanto em baixas concentrações o AK aumentou a inibição da atividade tirosinásica, a HQ somente inibiu a atividade enzimática. Os extratos inibiram a enzima até alcançarem um platô. Para sugerir um mecanismo de ação para os extratos, esses e os inibidores clássicos da tirosinase, AK e HQ, foram incubados com L-tirosinase. Nesse experimento, observou-se reversão do efeito inibitório da HQ, bem como dos extratos, sobre a atividade de tirosinase. Também foi verificada a associação de cada extrato com AK ou HQ. O AK associado à HQ, ao extrato de P. alata ou ao de P.edulis, inibiu a atividade tirosinásica significativamente em relação ao controle e ao AK isoladamente (p<0,001). Assim, pode-se sugerir que houve efeito sinérgico quando o AK foi associado a essas substâncias. Nas associações com a HQ, foi obtido estímulo enzimático com ambos os extratos. Os resultados dessas associações foram estatisticamente significantes quando comparados ao controle e à HQ isoladamente (p<0,001). Através dos resultados obtidos pode-se sugerir que substâncias presentes nos extratos de P. alata e de P. edulis disponibilizaram maior concentração de HQ para que esta pudesse agir sobre a tirosinase.

Abstract: Melanin is the main pigment that protects the skin against ultraviolet radiation. When in excess, it can lead to redness, freckles, and hyperpigmentation. Among the enzymes involved in melanogenesis, tyrosinase is one of the most important. Polyphenols are the largest group of tyrosinase inhibitors, and the majority of the compounds of the Passiflora genus are C-glycosyl flavonoids, which are polyphenolic compounds. The aim of this work was to characterize the effects of the extracts prepared from the leaves of P. alata, P. edulis, P. actinia, and P. incarnata on tyrosinase activity purified from Agaricus bisporus and from B16F10 murine cells. Using the MTT assay, it was established that the highest nontoxic concentration of extracts for B16F10 cells was 100 ?g/mL which has been used to evaluate the tyrosinase activity in vitro. Only P. alata and P. edulis extracts showed significant inhibitory activity against both fungal (p<0,01) and murine tyrosinases (P. alata = p<0,01 e P. edulis = p<0,05). In order to further explore the mechanisms underlying the inhibitory profile of these extracts, kojic acid (AK) and hydroquinone (HQ) were used as controls and their effects compared to those presented by P. alata and P. edulis extracts havin L-DOPA as a substrate. It was found that, while AK increased inhibition of tyrosinase activity, HQ inhibited its action but only at low concentrations. The extracts inhibited tyrosinase activity until they reached a plateau. In order to establish the mechanism of action for extracts, these and the classical inhibitors AK and HQ were incubated along with L-tyrosine. As a result, reversion of the inhibitory tyrosinase activity with HQ and also with the extracts was observed. We also observed the association of each extract with AK and HQ. AK associated with HQ or with the extracts significantly inhibited the tyrosinase activity compared to control or AK alone (p <0,001). These results suggest a synergic effect when AK was associated with these substances. In associations with HQ, however, significant stimulation of the enzymatic activity was obtained with both extracts (p<0,001). The results herein presented suggest that substances present in each one of the extracts of P. alata and P. edulis have provided a greater concentration of HQ that could act on tyrosinase activity.