Triagem de medicamentos homeopáticos que ativam macrófagos com detecçao e quantificaçao de IFN-y, IL-4 e NO

Abstract

Resumo: Homeopatia é um sistema terapêutico usado por milhões de pessoas há 200 anos. Macrófagos estão envolvidos em muitos diferentes processos, cujas principais funções são fornecer uma linha de defesa contra microrganismos invasores e células tumorais. Uma vez que medicamentos homeopáticos visam a ativação das próprias defesas do organismo para eliminar a doença, estudos baseados em cultivos obtidos de macrófagos podem ser úteis para esclarecer algumas questões. Com esse objetivo, nós estudamos os efeitos do tratamento in vitro de sete medicamentos homeopáticos, amplamente usados, em diversas diluições sobre os macrófagos obtidos de camundongos. Macrófagos foram obtidos de camundongos suíços e as culturas foram tratadas com 20% de cada solução sucussionada. Aconitum napellus (Acon), Arsenicum album (Ars), Belladonna (Bell), Bryonia alba (Bry), Lachesis muta (Lach), Mercurius solubilis (Merc sol) and Thuya occidentalis (Thuj) foram testados em diversas diluições (CH e DH) com três grupos controles: tratadas com o medicamento Canova, com etanol a 1% e sem tratamento algum. As células foram fixadas, coradas e observadas em microscopia de luz. Citocinas Th1/Th2 foram mensuradas no sobrenadante da cultura através do citômetro de fluxo. A produção de NO foi detectada no sobrenadante da cultura através de reação com o reagente de Griess. 50ng/ml LPS and 26U/ml IFN-gama foram usados como controle positivo. Após essas duas análise nós fizemos uma sobreposição dos dados e foi possível distinguir dois grupos de medicamentos baseados em respostas imunes Th1 e Th2. O primeiro grupo, Th 30CH; La 12, 200; CH, Ar 6CH; Me 6, 12CH; Be 6, 30 e 200CH, mostrou aumento na liberação de IFN-gama. E o segundo grupo, Ac 30CH; Me 200CH, aumentou a liberação de IL-4. As outras citocinas testadas, TNFa, IL-2 e IL- 5, não foram alteradas com a metodologia estudada. Todos os medicamentos acima testados induziram a produção de NO. IFN-gama possui um importante papel na promoção de respostas Th1 participando na defesa do hospedeiro contra infecções virais e agentes patológicos juntamente com NO. IL-4 leva a imunidade humoral via resposta Th2 e está envolvida na proliferação e diferenciação de células B, além de Ter um importante papel na inflamação e hematopoiese. Nosso estudo mostrou que vários medicamentos preparados homeopaticamente, mesmo aqueles que ultrapassam o número de Avogadro, atuam sobre macrófagos peritoneais de camundongos, quando tratados in vitro, ativando-os morfologicamente, estimulando a produção de citocinas Th1/Th2 e de óxido nítrico

Abstract: Homeopathy is a 200-year-old therapeutic system, which has been used by millions of people. In spite of the fact that homeopathic practitioners often paint a convincing picture of homeopathy clinical effectiveness, research evidences explaining how it actually works are lacking. Macrophages are involved in many different processes but their main function is to provide a defense line against microbial invasion and tumor cells. Once homeopathic medications are aimed at activation of the body’s own defense mechanisms to fight an existing disease, assays based in macrophages culture may be useful to enlighten some questions. We now carry on an investigation to evaluate the effects of in vitro administration of seven widely used homeopathic compounds in several dilutions on mice macrophages. Well-structured methodological studies may be useful to understand how homeopathy treatment works. Macrophages were obtained from Swiss mice and the cultures were treated in vitro with 20% of sucussioned solutions of Aconitum napellus (Acon), Arsenicum album (Ars), Belladonna (Bell), Bryonia alba (Bry), Lachesis muta (Lach), Mercurius solubilis (Merc sol) and Thuya occidentalis (Thuj) were tested in several CH dilutions with three control groups: treated with Canova medication, with 1% ethanol and withouth treatment. The cells were fixed, stained and observed under light microscopy. Mouse Th1/Th2 cytokine CBA kit for flow cytometry was used to determine cytokines in the culture supernatant. NO generation was estimated in cellfree supernatant, which was mixed with an equal volume of Griess reagent. 50ng/ml LPS and 26U/ml IFN-gama were used as positive control. It was possible to distinguish two groups of medication based Th1 and Th2-type response: the first group, Thuj 30CH; Lach 12, 200; CH, Ars 6CH; Merc sol 6, 12CH, Bell 6, 30 and 200CH, presented an increase in IFN-g production and the second one, Acon 30CH; Merc sol 200CH, increased IL-4 production. The others supernatant cytokines, TNF-g, IL-2 and IL-5, were not altered when this methodology was applied. All tested medication induced NO production. IFN-gama plays a role in promotion Th1 cell responses. It is an important cytokine in the host defense against infection by viral and microbial pathogens together with NO. IL-4 leads to Th2-type humoral immunity and it is involved in the proliferation and differentiation of B cells and IL-4 has an important role in inflamation and hematopoiesis. All together these data indicate that even the most diluted medication used, CH200, show a biological response, as observed on macrophages metabolism, activated morphologically, cytokine and oxide nitric production.