Análise de custos para a parametrização de kit Elisa para diagnóstico de tuberculose utilizando proteínas recombinantes

Abstract

Resumo: A tuberculose é uma doença infecto-contagiosa que ainda hoje representa um grave problema de saúde pública. O conhecimento e aplicação das técnicas diagnósticas, bem como a correta interpretação dos seus resultados, são fundamentais para o rápido controle da doença. A introdução de métodos diagnósticos, sensíveis, precisos e de baixo custo pode contribuir para a diminuição do número de casos a nível mundial. Nos últimos tempos houve um grande avanço no desenvolvimento de testes imunodiagnósticos com o surgimento dos anticorpos monoclonais e o aprimoramento na analise e identificação dos principais antígenos responsáveis pela ativação do sistema imunológico na presença do agente causador da tuberculose. Tais antígenos podem ser preparados em larga escala por síntese protéica e tecnologia recombinante, aumentando a especificidade do teste. O objetivo deste trabalho foi analisar o custo de produção de um kit diagnóstico utilizando a proteína recombinante ESAT 6 de Mycobacterium tuberculosis bem como padronizar e avaliar o reconhecimento desta proteína recombinante por anticorpos séricos da classe IgG em pacientes portadores de tuberculose doença através de método imunoenzimático indireto (ELISA). Utilizou-se como controle positivo para esta análise amostras de soro de pacientes em início de tratamento, com diagnóstico confirmado pelos métodos convencionais de baciloscopia, cultura, raios-X e PPD. Verificou-se que a proteína recombinante ESAT 6 foi reconhecida pelos anticorpos IgG séricos destes pacientes e apresentou reprodutibilidade satisfatória quando utilizada como antígeno de reação em concentração de 500?g por cavidade, numa diluição de amostra de 1:25 e concentração do conjugado de 1:10000. O cálculo do custo de produção de um kit diagnóstico ELISA utilizando esta proteína recombinante apresentou um valor aproximado de R$ 0,18 por análise o que torna o teste altamente viável para ser implementado em saúde pública quando comparado com o custo dos testes utilizados rotineiramente.

Abstract: Tuberculosis is an infectious disease that still represents a serious public health problem. The knowledge and application of diagnostic techniques, as well as the correct interpretation of their results, are essential for rapid disease control. The introduction of diagnostic methods, sensitive, accurate and low cost can help to reduce the number of cases worldwide. In recent times there has been a major breakthrough in the development of immunodiagnostic tests with the advent of monoclonal antibodies and improvement in the analysis and identification of key antigens responsible for immune system activation in the presence of the causative agent of tuberculosis. Such antigens can be prepared in large scale for protein synthesis and recombinant technology, increasing the specificity of the test. The objective of this study was to analyze the cost of production of a diagnostic kit using recombinant ESAT 6 protein of Mycobacterium tuberculosis as well as standardize and evaluate the recognition of this recombinant protein by serum IgG antibodies in patients with tuberculosis disease by microparticle enzyme immunoassay (ELISA). It was used as positive control for this analysis serum samples from patients starting treatment, as confirmed by conventional methods of microscopy, culture, x-rays and ppd. It was found that the recombinant protein ESAT 6 was recognized by serum IgG antibodies and these patients showed satisfactory reproducibility when used as used as antigen reaction 500?g concentration per wells in a 1:25 dilution of sample and conjugate concentration of 1:10000. The calculation of the cost of producing ELISA Diagnostic kit using this recombinant protein had an aproximate value US$ 0,11 per analysis which makes the TST highly feasible to be implemented in public health when compared to the cost the tests used routinely.