Análise de perda de heterozigose na Região 9p em portadores de tumores malignos de cavidade bucal

Abstract

Resumo: Os tumores de cabeca e pescoco apresentam uma alta incidencia no Brasil, permanecendo como uma das neoplasias com menor tempo de sobrevida para o paciente. Os metodos atuais para o diagnostico e tratamento desses tipos de tumores nao tem se mostrado eficazes, o que torna necessarios os avancos no estudo dos padroes genetico-moleculares da doenca. Alteracoes geneticas no braco curto do cromossomo 9 (9p), sugerem que esta regiao possa conter genes supressores tumorais, como os genes CDKN2A, CDKN2B e INFA, envolvidos no inicio e/ou progressao deste tipo de tumor. O envolvimento da regiao 9p foi investigado pela analise de marcadores microssatelites quanto a presenca de perdas de heterozigose (LOH) em 74 pacientes provenientes de Curitiba e Londrina-PR. Nas analises de LOH, foi utilizado DNA de sangue periferico de cada paciente como controle e DNA tumoral obtido de pecas a fresco para a avaliacao das perdas alelicas. As reacoes de PCR foram realizadas utilizando-se iniciadores marcados com agentes fluorescentes HEX (D9S200, D9S1748 e D9S157) e FAM (D9S169, D9S1749 e D9S171). Apos eletroforese em Sequenciador MegaBace 1000, os produtos foram analisados pelo software Fragment Profiler. Os calculos para a obtencao das frequencias de LOH foram realizados na sequencia. Em todos os locos analisados foram encontradas frequencias de LOH elevadas, variando de 21,31% a 51,51%. Dos seis marcadores analisados, dois (D9S157 e D9S200) mostraram frequencias de LOH superiores a 50%. A analise da frequencia de LOH em locos combinados tambem mostrou uma alta taxa de perda alelica, variando de 57,33% (em pelo menos um dos locos) a 8% (em quatro dos seis locos possiveis). Os marcadores microssatelites foram correlacionados a parametros histopatologicos e clinico. Apenas o parametro invasao de linfonodos regionais apresentou um resultado significativo para a analise conjunta dos marcadores (ƒÓ 21=4,121; P<0,05). Nosso estudo demonstra uma alta incidencia de perda de heterozigose no cromossomo 9 em 9p21 e 9p22-23, em carcinomas de celulas escamosas de cavidade bucal, sugerindo a existencia de possiveis genes supressores de tumor nestas regioes, além dos já clonados e possivelmente envolvidos na tumorigênese bucal, INFA e CDKN2A