Aspectos multiplos da cultura in vitro da Araucaria angustifolia (Bert) O. Ktze

Abstract

Resumo: Visando o desenvolvimento de um protocolo para a regeneração dos genótipos superiores da Araucaria angustífolia (Bert) O. Ktze, procurou-se verificar os aspectos básicos envolvidos e o comportamento da espécie quanto à micropropagação, através do cultivo dos segmentos caulinares de mudas de 30 a 60 dias, com a obtenção de brotos axilares ortotrópicos. Dos oito a 10 meristemas axilares presentes nestes segmentos, em cultivos no meio MS/2, desenvolveram-se em média dois a três brotos, dos quais, um a dois dominantes. Das citocininas utilizadas para a obtenção de maior número de brotos, verificou-se que a espécie é sensível à zeatina, mas em combinação com o meio MCM. As gemas apicais e os brotos dominados somente cresceram no meio básico MS/2, com o acréscimo de carvão ativado (5g, lOg ou 20 gil), e ácido giberélico (2 mg/l). O enraizamento (60% a 80%) dos brotos dominantes, foi obtido mediante o tratamento indutivo prévio por seis ou 12 dias, com o ácido indol-3-butírico (6 e 12 mg/I) em meio básico simples, contendo somente 30 g/l de sacarose e 6 g/l de ágar. A emergência e o desenvolvimento das raizes ocorreram nos meios MS/2 ou M514, com duas fases: uma superior com vermiculita e 4,5 g/l de ágar, na qual foram inseridas as bases dos brotos, e a inferior com 6 g/l de ágar, sem vermiculita. Embriões maduros da espécie não mostraram competência para a organogênese, face aos tratamentos testados, mas mostraram que é possível a multiplicação do meristema apical, por meio de tratamentos citocininicos indutivos com altas concentrações e curto prazo (duas-três horas). Para se contornar a limitação da pesquisa a três-quatro meses por ano, imposta pela periodicidade da frutificação, foram testados, com sucesso, dois tipos de armazenamento a frio: o dos pinhões, a -2°C, com 80% de germinação após seis meses; das mudas de 30 a 60 dias, a 4°C, com inibição total do crescimento; também por seis meses. Verificou-se ser viável o rejuvenescimento ex vitro dos indivíduos adultos da espécie, mediante enxertias sucessivas em mudas de 4-6 cm de altura, e em condições ambientais controladas (17 °C ± 2 °C, 60 a 90% de umidade relativa). Os estudos anatômicos mostraram que a Araucária tem grande poder de regeneração, pela rapidez (15 dias) da organização dos meristemas axilares em brotos; capacidade de desdiferenciação das células parenquimáticas do córtex, para a formação do tecido pró-vascular para a conexão dos brotos e segmento caulinar de origem e formação das raizes a partir de células pró-vasculares do calo basal dos brotos. As raízes formadas provaram ser funcionais pela boa sobrevivência das mudas obtidas e transplantadas para o solo. O desenvolvimento do protocolo da multiplicação da espécie via microestacas de mudas é possível, havendo no entanto a necessidade de se ampliar os estudos relativos à obtenção de brotos multiplos a partir dos meristemas axilares do caule.

Abstract: The aspects involved on in vitro multiplicafion of selected genotypes of Araucaria angustifoiía (Bert) O. Ktze were the principal aim of this research. The results and the steps for working throughout the year were presented. Single orthotropic shoots could be obtained only in a small number, 2 to 3 per stem segment cultivated on MSI2. There were no responses to cytokinins treatments, except zeatin in MCM basal medium. However, apical stem meristem of Araucaria mature embryos showed that the possibility of forming multiple buds exist, despite of the low rates obtained with cytokinins in pulse treatments. Adventitious bud formation did not occurred on cotyledons and hypocotils ofthese treated embryos. Dominant axillary shoots rooted at 60% to 80% rates, with 6mg or 12 mg/l of indole-butynic acid in a 6 or 12 days pulse treatments for root induction, and two phases MS/2 or MS14 - vermiculite basal medium, for roots emergence and development. Transplanted to soil, Araucaria's plantlets were sucessfut Dom inated axillary shoots and seedlings apical shoots elongated to 4-8 cm, within 60 to 90 days in MS/2, plus 5g, lOg or 20 gil of activated charcoal and 2 mg/l of giberellic acid. Ex vitro rejuvenation of Araucaria was outlined, and may be possible through serial graftings, under controlled conditions of temperature (17 °C ± 2 °C) and 60% to 90% of relative umidity. Storage of seeds and inhibition on seedlings development were obtained in refrigerators at -2 °C and 4 °C respectivelly. To establish a protocol for Araucaria in vitro multiplication through orthotropic axillary branching, depends only on the multiple buds formation which need to be studied in details, possibly through zeatin treatments. Anatomical studies revealed that Araucaria has a high regenerative potential because of the short period (15 days), necessary for the organization of axillary residual meristems to forming shoots, and the differentiation of cortex cells originating provascular tissue for connecting the formed shoots to seedlings explant. Roots were formed from provascular tissue of basal callus, developing into normal ones, proved through the good pertormance of transplanted plantlets.