Produção e caracterização de anticorpos monoclonais anti-gp51 do vírus Leucose Bovina (VLB)

Abstract

Resumo: O objetivo do presente trabalho foi produzir e caracterizar anticorpos monoclonais (AcMc) contra proteína gp51 para insumo de diagnóstico da Leucose Enzoótica Bovina. Foram utilizadas duas preparações do antígeno para imunização em camundongos BALB/c, a partícula viral in natura e o vírus lisado. Estas preparações foram selecionadas para obtenção de anticorpos monoclonais específicos para proteínas da partícula viral e proteínas virais intracelulares do VLB, respectivamente. Os animais foram imunizados por via intraperitonial devido a toxicidade causada pelo tampão de lise em outras vias de noculação. A fusão realizada originou 274 colônias de hibridomas, sendo 18 hibridomas positivos em ELISA indireto e nove fraco positivo, inicialmente descartados. O teste de estabilidade de secreção de anticorpos permitiu selecionar 10 hibridomas, que foram caracterizados pela rea ividade em Western Blotting, para proteína gp51 (dez AcMc), e por isotipagem em IgG1 (um AcMc); IgM (nove AcMc). Todos os AcMc foram produzidos para gp51 comprovando ser a proteína do VLB mais imunogênica e acessível, presente em diferentes preparações antigênicas. A produção de AcMc ascítico mostrou aumento qualitativo e quantitativo de secreção de anticorpos, quando comparado aos AcMc que não foram submetidos ao líquido ascítico.

Abstract: The objective of this work was to produce and characterize monoclonal antibodies (mAbs) against the protein gp51 for a diagnosis input of the Bovine Enzootic Leukosis. Two different preparations of the antigen for immunizing BALB/c mice were used, in natura viral particle and lysate virus. These preparations were selected to obtain specific monoclonal antibodies for the viral particle protein and BLV intracellular viral proteins, respectively. The animals were immunized through intraperitoneal way due to the toxicity caused by the lysis buffer in other ways of inoculation. The fusion originated 274 hybridoma colonies, from which 18 hybridomas were positive on indirect ELISA and nine were weak positive, initially discarded. The stability test of antibodies secretion, 10 hybridomas were selected, characterized by the Western Blotting reactivity, for the protein gp51 (ten mAbs) and by isotyping IgG1 (one mAb); IgM (nine mAbs). All mAbs were produced for gp51 proving to be the BLV most immunogenic and accessible protein present in different antigenic preparations. The production of ascitis mAbs has shown a qualitative and quantitative improvement of the mAbs secretion when compared with the (mAbs) were not subject to ascites fluid.