Caracterização fenotípica e molecular de estirpes de Aeromonas isoladas no Paraná no período de 1999-2009

Abstract

Resumo: Aeromonas são bacilos gram-negativos, anaeróbios facultativos, fermentadores de glicose, oxidase e catalase positivos, ubíquos em ambientes aquáticos e capazes de causar uma variedade de doenças em humanos, incluindo gastrenterite. As espécies mais comumente associadas com infecções em humanos são A. hydrophila, A. caviae e A. veronii biovar sobria. Poucos são os dados disponíveis sobre Aeromonas no Brasil. Os objetivos deste trabalho foram caracterizar estirpes de Aeromonas isoladas no Estado do Paraná durante o período de 1999 a 2009, utilizando a metodologia bioquímica convencional e automatizada e PCR-RFLP, assim como avaliar o perfil de suscetibilidade aos antimicrobianos. Setenta e quarto estirpes de Aeromonas foram analisadas, utilizando 26 testes bioquímicos convencionais, o sistema automatizado VITEK® 2 Compact e PCR-RFLP do gene 16S rDNA. Quatro espécies de Aeromonas foram encontradas: A. caviae (70,3%), A. veronii biovar sobria (17,6%), A. hydrophila (8,1%), e A. trota (4%). A identificação bioquímica convencional identificou corretamente 98,6% (73/74) das estirpes em comparação com a identificação molecular por PCR-RFLP. A identificação automatizada obteve 90,5% (67/74) de identificações corretas. Oito estirpes de A. caviae mostraram padrões de PCR-RFLP atípicos. Uma estirpe de A. caviae mostrou um padrão bioquímico incomum, o que levou a sua identificação errônea nos sistemas convencional e automatizado como A. hydrophila. A prevalência de Aeromonas foi maior na faixa de 0 a 10 anos de idade e nas cidades de Curitiba/PR (39%) e Paranaguá/PR (34%). O Sistema VITEK® 2 Compact identificou duas das estirpes como Vibrio vulnificus e V. cholerae, o que foi prevenido com a utilização de NaCl 0,85% no preparo no inoculo. Foram observadas diferenças entre os perfis de resistência aos antimicrobianos identificados pelo sistema VITEK® 2 Compact, e aqueles obtidos pelo método de disco-difusão. Com exceção da ampicilina, cefalotina e cefazolina, cinquenta e quatro por cento das Aeromonas foram suscetíveis aos demais antimicrobianos testados. O conhecimento sobre as características fenotípicas e moleculares de Aeromonas será importante para os estudos epidemiológicos, o que poderá auxiliar no controle e tratamento das diarréias causadas por esse microrganismo.

Abstract: Aeromonas are gram negative rods, facultatively anaerobic, glucose fermenters, oxidase and catalase positive, ubiquitous in aquatic environments and capable to cause a variety of diseases in humans, including gastroenteritis.The species most commonly associated with human infections are A. hydrophila, A.caviae, and A. veronii biovar sobria. There are few data available on Aeromonas in Brazil. The aims of this work were to characterize strains of Aeromonas isolated in Parana state during the period of 1999 to 2009, utilizing conventional and automated biochemical methodologies and PCR-RFLP, and to evaluate antimicrobial susceptibility. Seventy four strains of Aeromonas were analysed utilizing 26 conventional biochemical tests, the VITEK® 2 Compact automated system and 16S rDNA gene PCR-RFLP. Four species of Aeromonas were found: A. caviae (70,3%), A. veronii biovar sobria (17,6%), A. hydrophila (8,1%), and A. trota (4%). The conventional biochemical identification identified correctly 98,6% (73/74) strains in comparing to the PCR-RFLP molecular identification. The automated identification showed 90,5% (67/74) of correctly identifications. Eight strains of A. caviae showed atypicals PCR-RFLP profiles. One strain of A. caviae howed an uncommon biochemical pattern leading to its wrong classification by conventional and automated systems as A. hydrophila. The prevalence of Aeromonas was higher among people ages 0 to 10 years, and in the cities of Curitiba/PR (39%) and Paranaguá/PR (34%). The VITEK® 2 Compact system identified two of the strains as Vibrio vulnificus and V. cholerae, what was prevented with the use of NaCl 0,85% to prepare the inoculum. Some differences were observed between the resistance profiles to antimicrobials identified by the VITEK® 2 Compact system and the disc diffusion method. With the exception of ampicillin, cephalotin and cephazolin, fifty four per cent of the Aeromonas were susceptible to the others antimicrobials tested. The knowledge about phenotypical and molecular characteristics of Aeromonas will be important to epidemiologic research, and could help in the control and treatment of diarrhoea caused by this microrganism.