Desenvolvimento e validação de métodos analíticos para controle de qualidade de matérias-primas e produto contendo Uncaria tomentosa (Willd.) DC. -Rubiaceae

Abstract

Resumo: Cascas do caule e raiz de Uncaria tomentosa, popularmente conhecida como unhade- gato, sao utilizadas no tratamento de diversos casos de inflamacoes, cancer e processos virais. Planta nativa da America do Sul possui varias de suas propriedades farmacologicas associadas aos alcaloides oxindolicos (AO). Os AO presentes na especie sao classificados em pentaciclicos (AOP) e tetraciclicos (AOT). Os AOT (rincofilina e isorincofilina) possuem acentuada acao no sistema nervoso central e sao considerados antagonistas dos AOP (especiofilina, uncarina F, mitrafilina, isomitrafilina, pteropodina e isopteropodina), portanto devem ter seu teor controlado. O presente trabalho apresenta o desenvolvimento e validacao de metodos para o controle de qualidade de U. tomentosa e seus derivados farmaceuticos tintura e gel, por CLAE. Entre os diferentes alcaloides constituintes da especie, o alcaloide mitrafilina foi indicado apos avaliacoes como o mais adequado para padronizacao do material utilizado. O metodo CLAE para casca e tintura e o preparo da amostra casca foram otimizados com planejamento fatorial de experimentos. A analise por espectrometria de massas de amostras da planta indicou presenca de AOP ainda nao descritos na especie, provavelmente uncarinas A e B, e o oxindolico rauniticina allo A ou B. Para analise do gel foi desenvolvido metodo de preparo da amostra pela aplicacao da tecnica de dispersao de matriz em fase solida (MSPD) e quantificacao por CLAE. A seletividade / especificidade dos metodos foram avaliadas atraves da determinacao da pureza dos picos, comparacao dos perfis espectrais entre padrao e amostra, analise do placebo do gel, verificacao do paralelismo das curvas de padrao e amostra adicionada de padrao para cascas e tintura e analise por espectrometria de massas para cada um dos alcaloides no metodo para casca. Linearidade com coeficiente de correlacao (r) igual a 0,9998 e 0,9997 foi obtida com o padrao analitico para os metodos da casca e gel respectivamente. Limites de 0,80 e 1,41 ƒÊg.mL-1 (deteccao) e 2,40 e 4,27 ƒÊg.mL-1 (quantificacao) foram obtidos para metodo CLAE da casca e gel respectivamente. Precisao com desvio padrao relativo (DRP) inferior a 2,30%, recuperacao superior a 98,37% para exatidao e r de 0,9979 foram obtidos para o metodo da casca. Para o metodo de analise da tintura valores de precisao com DPR inferior a 0,93%, linearidade com r de 0,9989 e recuperacao superior a 98,37% para exatidao foram encontrados. Para o gel a validacao apresentou valores de DPR inferior a 1,96% nos ensaios de precisao, r de 0,9927 para linearidade e minimo de 98,78% de recuperacao para a exatidao. Finalmente o trabalho demonstrou que os metodos permitem analises confiaveis da droga U. tomentosa, sua tintura e gel contendo como ativo a tintura da planta.

Abstract: Stem and root barks of Uncaria tomentosa, popularly known as cat’s claw, are used in the treatment of several cases of inflammations, cancer and viral processes. The plant is native from South America and possesses several of its pharmacological properties associated with the oxindole alkaloids (OA). The OA found in the specie are classified in pentacyclic (POA) and tetracyclic (TOA). TOA (rhynchophylline and isorhynchophylline) possess accentuated action in the central nervous system and are considered antagonists of POA (speciophylline, uncarine F, mitraphylline, isomitraphylline, pteropodine and isopteropodine), therefore their amount should be controlled. This work presents the development and validation of methods for quality control of U. tomentosa plant material and a gel formulation containing its tincture, by HPLC. Among the different alkaloids present in the specie, the alkaloid mitraphylline was indicated as the most suitable for standardization of the used samples. Both the bark sample preparation and the HPLC method for bark and tincture preparation were optimized with statistical experimental design. The mass spectrometry analysis of species sample indicated the presence of POA still not described in the specie, probably uncarines A and B, and the oxindolic rauniticine allo A or B. Sample preparation method for gel analysis was developed with the application of the technique of matrix solid-phase dispersion (MSPD) and HPLC quantification. The selectivity and specificity of the methods were evaluated through the determination of the peak purity, comparison of the spectral profiles between standard and sample, analysis of the placebo of the gel, verification of the parallelism of analytical curves and sample spiked with standard for bark and tincture and mass spectrometry analysis for each one of the alkaloids in the bark method. Correlation oefficients (r) equal to 0,9998 and 0,9997 were obtained with the analytical standard in the linearity test respectively for the methods of bark and tincture. Limits of 0,80 and 1,41 ìg.mL-1 (detection) and 2,40 and 4,27 ìg.mL-1 (quantification) were obtained respectively for HPLC method of bark and gel. Precision with relative standard deviation (RSD) lower than 2,30%, recovery higher than 98,37% for accuracy and r of 0,9979 were obtained for bark method. For tincture method of analysis values of precision with RSD lower than 0,93%, linearity with r value of 0,9989 and recovery higher than 98,37% for accuracy were found. For gel validation RSD values lower than 1,96% for precision tests, r value of 0,9927 for linearity and recovery higher than 98,78% for accuracy were found. Finally the present work demonstrated that the methods allowed reliable analyses of the drug U. tomentosa, its tincture and gel containing the plant tincture as active principle. Key words: Uncaria tomentosa DC. Mitraphylline