Avaliação da ação antitumoral do complexo natural altamente diluído M1 em células de melanoma humano 1205LU

Abstract

Resumo: O melanoma metastático é a forma mais agressiva de câncer de pele, sendo que aproximadamente 10% dos indivíduos apresentam sobrevida de até 5 anos após o estabelecimento de metástases. Ainda, as abordagens de tratamento envolvendo quimio e radioterapia têm se mostrado pouco eficazes além de efeitos adversos graves. Estudos prévios do Laboratório de células neoplásicas e inflamatórias da Universidade Federal do Paraná utilizando complexos naturais altamente diluídos provenientes de extratos naturais, demonstraram que tais complexos têm efeito modulatório sobre células do sistema imunitário relacionadas com diversos processos celulares importantes na abordagem anticâncer. Uma vez evidenciado, em modelo murino, que tais compostos mostram-se eficazes na promoção de alterações no perfil de expressão gênica, produção de citocinas e alterações morfológicase também na modulação da atividade de células mononucleares no sentido de uma melhor resposta frente a um quadro tumoral, o presente estudo teve como objetivo avaliar o efeito do tratamento in vitro com o complexo natural altamente diluído M1 sobre a linhagem de melanoma metastáticas humano 1205Lu, assim como testar a influência imunitária do tratamento num modelo de cocultura envolvendo células mononucleares humanas obtidas a partir de filtros de leucorredução (câmaras LRS) e células de melanoma 1205Lu. Os resultados mostraram que as células mononucleares previamente tratadas (in vitro) com o complexo natural altamente diluído M1 e posteriormente submetidas à cocultura, promoveram nas células 1205Lu uma redução na taxa de proliferação celular, indução da parada do ciclo celular, aumento da apoptose celular e redução significativa na produção de espécies reativas de oxigênio e nitrogênio. Além disso, redução no potencial invasivo e uma menor expressão de beta-catenina pelas células 1205Lu foi também observada. Quanto às células mononucleares, um aumento na população de células Natural Killer (NK) CD3- /CD56+ foi observado no grupo tratado. Ainda, para células NK isoladas a partir da cultura de células mononucleares e cocultivadas com células 1205Lu, o grupo tratado com o complexo M1 revelou um aumento significativo na citotoxicidade celular frente as células de melanoma. Portanto, o tratamento prévio com o complexo natural altamente diluído M1 demonstrou ser uma abordagem eficaz, não tóxica e barata para melhorar importantes efeitos antitumorais na população de células mononucleares humanas contra o melanoma.

Abstract: Metastatic melanoma is the most aggressive form of skin cancer, and the most rapidly expanding cancer in terms of worldwide incidence with a 5 years survival rate of less than 10% after metastasis establishment. Besides that, chemo and radiotherapeutic approaches in melanoma treatment have been shown disappointing results, also resulting in severe adverse effects. Previous studies conducted in Laboratory of Inflammatory and Neoplasic Cells from Universidade Federal do Paraná using murine models, have demonstrated that highly diluted natural complex were able to induce: macrophage activation; an increase in nitric oxide production; and increase in CD45R+ cells in bone marrow, a decrease in tumor growth in Sarcoma 180 in vivo model and an increase in tumoricidal response of activated lymphocytes against B16F10 melanoma cells in vitro. Here, we performed assays to evaluate in vitro effects of highly diluted natural complex, M1, in human metastatic melanoma cell lineage 1205Lu. Also, we have tested the treatment immunological influence in a coculture model between human mononuclear cells obtained from lekoreduction chambers (LRS chambers) after plateletpheresis procedure, and melanoma cells (1205Lu). Results have shown that mononuclear cells previously treated (in vitro) for 48 hours with M1 and then submitted to coculture, promoted a reduction in proliferation rate a, induced cell cycle arrest and a increased cell apoptosis in 1205Lu cells. Also, a significant reduction in nitrogen and oxygen reactive species production was seen in tumoral cells. Combined to those results, a reduction in cell invasion and a lower betacatenin expression was also observed. Besides that, when mononuclear cells were analyzed by flow cytometry an increase in CD3-/CD56+ Natural Killer cell population was seen in treated group. Finally, when isolated from mononuclear cultures, and co- cultured with 1205Lu, Natural Killer cells from M1 treated group, revealed a significant increased citotoxicity against melanoma cells. In conclusion, pre treatment with the highly diluted natural complex M1 demonstrated to be an effective and non-toxic approach to improve important anti tumoral effects in human mononuclear cell population against melanoma.