| dc.description.abstract | Resumo : A via das lectinas do sistema complemento é ativada pela proteólise das serinas proteases (MASPs) associadas à lectina ligante de manose (MBL) ou às ficolinas (Ficolina-1, Ficolina-2 e Ficolina-3). De acordo com estudos recentes, a proteína sérica ficolina-2 apresenta polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) na região promotora, os quais estão associados a reduções nos níveis de expressão do gene e diminuição da ativação do sistema complemento ou da eficiência fagocítica. Neste trabalho, otimizou-se a técnica de PCR sequência-específica (PCR-SSP) para a identificação dos SNPs -986, -602 e -4 da região promotora de FCN2 em uma amostra de 139 euro-brasileiros e analisou-se a evolução molecular deste polimorfismo através dos dados obtidos previamente pelo sequenciamento de outros 137 euro-brasileiros. A técnica foi otimizada com sucesso por meio de duas PCRsSSP biespecíficas, havendo 100% de concordância com os dados de sequenciamento em 12 controles cegos. A distribuição genotípica está em equilíbrio de Hardy e Weinberg, sendo que os haplótipos encontrados, GGA (48,6%), AGG (24,1%), AAA (21,2%) e AGA (6,1%) não diferem significativamente das frequências de populações europeias encontradas na literatura. O desequilíbrio de ligação foi verificado para todas as combinações de loci, sendo que não foram encontradas as combinações -986*G/-602*A, -986*G/-4*G e -602*A/-4*G. As regiões de maior diversidade nucleotídica foram identificadas em torno das posições dos SNPs -986 (Pi=0,00501), -602 (Pi=0,00499) e -4 (Pi=0,00568). A hipótese de neutralidade seletiva foi rejeitada na comparação com um grupo externo com H de Fay e Wu igual a -3,6067 (p<0,01). A árvore filogenética apresenta dois clados distintos, um mais antigo, constituído de haplótipos -986/-602/-4 associados a baixos níveis séricos, outro mais recente, contendo haplótipos 986/-602/-4 associados a altos níveis séricos de ficolina-2. Excluindo-se os haplótipos duvidosos, foi possível inferir os passos mutacionais entre os haplótipos em questão. Segundo o teste WSRT (Wilcoxon Signed Rank Test), houve desvio da média de 8.000 ng/ml das concentrações de ficolina-2 associadas aos genótipos GGA (p=0,008), RGR (p=0,016) e RRA (p=0,031), o que é esperado conforme a literatura. Comparada com a técnica de sequenciamento, a PCR-SSP biespecífica foi considerada igualmente confiável e muito mais rápida e econômica, apresentando a vantagem adicional de permitir a haplotipagem física dos SNPs investigados. De fato, por meio dos resultados da PCR-SSP, identificaram-se prováveis erros gerados pela reconstrução de haplótipos com o algoritmo ELB. Com base na análise filogenética, sugere-se que concentrações baixas de ficolina-2 representam o fenótipo mais antigo de FCN2 na espécie humana. Já os resultados dos testes de neutralidade seletiva levam-nos a sugerir que o efeito carona pode ter ocorrido por seleção positiva dos SNPs -986*G>A, -602*G>A e -4*A>G, associados a altas concentrações de ficolina-2, ou através da expansão demográfica da população humana. | pt_BR |
