Avaliação interespecífica do reconhecimento da vitelogenina pelo anticorpo anti vitelogenia de Rhamdia quelen, piaractus mesopotamicus e Prochilodus lineatus
Abstract
Resumo : O crescimento da população humana e o avanço da indústria e da agricultura geram uma gama de substâncias que potencialmente podem causar diversos problemas aos ambientes naturais. O despejo de substâncias químicas antropogênicas nos corpos d’água é cada vez mais frequente, afetando organismos residentes neles e comprometendo a qualidade da água para o consumo humano. Dentre estas substâncias estão os desreguladores endócrinos (DE's) que afetam a homeostasia endócrina e todas as funções controladas por este sistema. A detecção de DE's no ambiente pode ser verificada pela indução na expressão da fosfolipogicoproteína vitelogenina em peixes machos. Essa proteína é responsável pela formação do vitelo e é expressa em grande quantidade em fêmeas no período reprodutivo, sendo induzida pelo hormônio 17ß-estradiol. Esse hormônio, ou substâncias análogas a ele, quando presentes no ambiente, podem induzir a expressão desta proteína em indivíduos machos. Para a detecção da mesma, pode-se utilizar diversos ensaios de imunomarcação, sendo um deles o Western blot. Para sua realização é necessário a utilização de anticorpos. Porém, devido ao elevado custo de aquisição dos mesmos torna-se inviável seu uso em estudos de biomonitoramento, onde grandes quantidades de amostras são coletadas e requerem grandes volumes de anticorpos. Para viabilizar o uso de anticorpos em estudos de biomonitoramento, é frequente que os mesmo sejam produzidos pelo laboratório que faz este tipo de análise. Frente a este cenário, o objetivo desse estudo foi testar a especificidade e a sensibilidade de anticorpos policlonais, produzidos previamente no Laboratório de Toxicologia Celular, para as espécies Rhamdia quelen, Piaractus mesopotamicus e Prochilodus lineatus. O anticorpo de R. quelen reagiu especificamente com a vitelogenina correspondente numa diluição de 1:140000, e possui uma sensibilidade de 1 µg de proteínas totais por poço do gel; reagiu especificamente com a vitelogenina de P. mesopotamicus numa concentração de 1:64000, com uma sensibilidade 10 µg de proteínas totais; reagiu especificamente com a vitelogenina de P. lineatus numa diluição variando de 1:32000 a 1:64000, com uma sensibilidade variando de 1 a 50 µg de proteínas totais; O anticorpo de P. mesopotamicus reagiu especificamente com a vitelogenina correspondente numa diluição variando de 1:64000 a 1:80000, com uma sensibilidade variando de 1 a 25 µg de proteínas totais; reagiu especificamente com a vitelogenina de P. lineatus numa diluição, variando de 1:16000 1:64000, com uma sensibilidade variando de 1 a 20 µg de proteínas totais; não houve reação específica entre o anticorpo de P mesopotamicus e a vitelogenina de R. quelen. O anticorpo de P. lineatus reagiu especificamente com a vitelogenina correspondente numa diluição de 1:64000, com uma sensibilidade variando de 1 a 4 µg de proteínas totais; reagiu especificamente com a vitelogenina de P. mesopotamicus numa diluição variando de 1:32000 a 1:64000, com uma sensibilidade variando de 1o a 20 µg de proteínas totais; não houve reação específica entre o anticorpo de P. lineatus e a vitelogenina de R. quelen. A ausência de reação nos anticorpos de P. mesopotamicus e P. lineatus com a vitelogenina de R. quelen, podem ter correlação com questões evolutivas, por serem de ordens diferentes, como também podem ser de origem imunológica advinda do organismo onde foi produzido os anticorpos. Desta forma conclui-se que o anticorpo de Rhamdia quelen é o mais adequado para ser utilizado em estudos de biomonitoramento.
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