Clonagem e caracterização de uma proteína zinc finger CCCH em Trypanosoma Cruzi
Abstract
Resumo : O protozoário Trypanosoma cruzi, agente etiológico da Doença de Chagas, apresenta muitas peculiaridades em relação à sua regulação gênica, que ocorre preferencialmente em nível pós-transcricional. Um dos mecanismos envolve a modulação da estabilidade dos mRNAs por meio de interação com proteínas. A partir de estudos baseados em análises de proteômica utilizando frações polisomais de T. cruzi verificou-se a presença de uma proteína identificada como pertencente à família zinc finger (dedo de zinco) motivo CCCH, denominada de TcZFP5. Proteínas da família dedo de zinco CCCH são proteínas de ligação à RNA que modulam a expressão gênica em eucariotos inferiores e superiores. Análises iniciais das frações polisomais obtidas por meio de gradiente de sacarose sugeriram sua associação aos mesmos. Entretanto, a dissociação dos polisomos pela adição de puromicina não causou a dissociação de TcZFP5 das frações pesadas do gradiente, indicando que TcZFP5 não está associada de fato aos polisomos, mas que a mesma faz parte de um complexo de alto peso molecular independente do polisomo. Ensaios preliminares de Western blot indicam que o perfil de expressão gênica da proteína TcZFP5 ocorre de modo constitutivo ao longo da metaciclogênese. Atualmente, estamos realizando ensaios do tipo pull down com o objetivo de verificar a interação de TcZFP5 com outras proteínas e mRNAs. A compreensão da função da proteína TcZFP5 poderá contribuir para o entendimento da função dessa família de proteínas no controle póstranscricional dos eventos relacionados ao ciclo de vida dos tripanosomas.
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- Bacharelado [1169]