Correlação entre distribuição de Ephrinas-B e glicoconjugados PNA-positivos e trajetos migratórios de células da crista neural : análise ao nível vagal em embriões de galinhas leghorn, e de galinhas leghorn e sedosa japonesa ao nível do tronco

Abstract

Ao nível vagal as células da crista neural povoam diferentes regiões no embrião em três ondas migratórias: uma dorsolateral precoce (crista circunfaringeal), uma ventral (linhagens glial e neuronal) e uma dorsolateral tardia (melanoblastos). Ao nível do tronco estas células se segregam em duas ondas: ventral (linhagens glial e neuronal) e dorsolateral (melanoblastos). Galinhas da raça Sedosa Japonesa (SJ) exibem intensa pigmentação de órgãos internos, que é resultado da dispersão atípica de melanoblastos. Muitas moléculas têm sido descritas por influenciar positiva ou negativamente a migração das células da crista neural. Ephrinas-B e glicoconjugados PNA-positivos estão presentes na porção posterior do somito, conferindo o padrão segmentado de distribuição de precursores neuronais, que usam exclusivamente a porção anterior do somito para migração. Melanoblastos parecem ser estimulados por ephrinas para seguir a via dorsolateral. Correlacionando o padrão de expressão de ephrinas e a distribuição de glicoconjugados PNA-positivos na região do tronco com a dispersão atípica de melanoblastos em embriões de SJ, é possível verificar que áreas mais ventrais, incluindo o somito posterior, expressam ephrinas num padrão que está correlacionado com caminhos livres de glicoconjugados PNA-positivos. Embriões de galinhas da raça Leghorn, usados como controle, não apresentam ephrinas em caminhos ventrais, estando estes ocupados por glicoconjugados PNA-positivos. Os resultados sugerem que ephrinas e glicoconjugados desempenham um papel combinatório, os primeiros estimulando migração de melanoblastos e sendo necessários, enquanto os outros atuariam como influência inibitória estando portanto ausentes dos caminhos seguidos por melanoblastos. Injeções pontuais do corante vital DiI ao nível vagal (do somito 2 até 5) confirmaram a ocorrência das três ondas migratórias, não sendo observadas diferenças no padrão de dispersão da crista neural entre os 4 primeiros somitos permanentes. As primeiras células seguem a via dorsolateral entre os estágios 9 e 14, e se aglomeram ao redor da veia cardinal anterior. As células que seguem a via ventral, migram entre os estágios 13 e 15 através do esclerótomo logo adjacente ao dermátomo, contornam a aorta dorsal e mais tarde se posicionam em torno da faringe. A terceira onda ocorre através da via dorsolateral e se inicia no estágio 20. Estes resultados foram confirmados com a utilização de imunomarcação das células da crista neural com o anticorpo HNK-1. Analisando a distribuição de ligantes ephrina-B neste nível axial, é possível observar que a via dorsolateral é positiva, enquanto que o caminho ventral é negativo para estes ligantes em todos os estágios analisados (12-22). Da análise da distribuição de glicoconjugados PNA-positivos no nível vagal, observa-se que eles estão ausentes nos tempos e caminhos correspondentes a cada onda migratória, corroborando a sugestão do seu papel inibitório à migração da crista neural.

Neural crest cells at vagal level populate various embryonic regions, following three migratory waves: one early, dorsolateral (circumpharyngeal crest), one ventral (neuronal and glial lineages) and a later, dorsolateral one (melanoblasts). At trunk level neural crest cells segregate in two waves: ventral (neuronal and glial lineages) and dorsolateral (melanoblasts). Japanese Silky chicken (SK) exhibits massive pigmentation of internal organs, which is the result of atypical melanoblast dispersion. Several molecules have been described as positive or negatively influencing neural crest cells migration. Ephrins and PNA-positive glycoconjugates are present in the posterior somite, giving a segmented pattern to the distribution of neuronal precursors that use only the anterior half of the somite for migration. Melanoblasts seem to be stimulated by ephrins to follow the dorsolateral path. Correlating the expression pattern of ephrins and PNA-positive glycoconjugates distribution in trunk region with the atypical melanoblast dispersion in SK embryos, it was possible to verify that more ventral areas, including posterior somite, expressed ephrins, in a pattern that correlates to the paths free of PNA-positive glycoconjugates. Leghorn embryos, used as control, displayed no ephrin in the ventral paths that were occupied by PNA-positive glycoconjugates. From these results it is possible suggest that ephrins and glycoconjugates play a combinatory role, the first ones stimulating melanoblast migration and being necessary, while the others have an inhibitory influence and so have to be absent of the paths followed by the cells. Focal injections of the vital dye DiI at vagal level (somite 1 to 4), confirm the occurrence of three migratory waves, without differences in the dispersion pattern of neural crest between the first four somites. The first cells follow the dorsolateral path between stages 9 and 14, and agglomerate around of the anterior cardinal vein. The cells that follow the ventral path, migrate between stages 13 and 15 through the sclerotome just adjacent to the dermatome, turn to the dorsal aorta and later on are located around the pharynx. The third wave occurs through the dorsolateral path and is initiated at stage 20. These results were confirmed by immunolabeling with HNK-1 antibody. Analysing the distribution of ephrin-B ligands at this axial level, it was possible to observe that the dorsolateral path expresses the ligands, while the ventral path is negative for them at all analysed stages (12-22). Analysis of the PNA-positive glycoconjugates at vagal level, showed that they are absent of the paths at the time of each migratory wave, reinforcing the suggestion of an inhibitory role in neural crest migration.