Efeito do óleo de fígado de tubarão e óleo de peixe sobre a viabilidade de linfócitos expostos ao quimioterápico fluoruracila in vitro

Abstract

Resumo: Introdução: A quimioterapia usada no tratamento de neoplasias malignas pode provocar leucopenia, que pode levar à necessidade de suspensão do tratamento até a melhora da imunidade. Mesmo havendo muitos estudos que mostram o efeito imunomodulatório de alguns lipídios, pouco se sabe sobre os mecanismos envolvidos. Objetivos: Avaliar viabilidade/capacidade proliferativa dos linfócitos após período de incubação na presença de óleo de fígado de tubarão (OFT) ou óleo de peixe (OP) e/ou quimioterápico. Material e métodos: Células mononucleares do plasma de homens saudáveis com idade de 20 a 30 anos, foram obtidas e separadas em 12 grupos experimentais para avaliação da capacidade proliferativa (Alamar Blue®) em presença de óleo de peixe (OP) ou óleo de fígado de tubarão (OFT) (complexados com soro fetal bovino), associados ou não ao quimioterápico (Qt), com estímulo do mitógeno concanavalina A (ConA). Apoptose e necrose celular também foram avaliadas após 72 horas de incubação por citometria de fluxo, e a presença de AGPI n-3 no sobrenadante das células foi avaliada por HPLC. Os dados foram submetidos à análise de variância de uma via (ANOVA), seguida de pós-teste de Tukey, nível de significância p < 0,05. Resultados e discussão: Resultados obtidos com AlamarBlue® revelaram que linfócitos tratados com quimioterápico associado com OP ou OFT demonstraram maior viabilidade celular do que os submetidos apenas ao quimioterápico. As células tratadas com Qt1+OFT mantiveram-se 54%, 42% e 36% mais viáveis que as células tratadas apenas com quimioterápico, em 24, 48, e 72h, respectivamente. As tratadas com Qt1+OP apresentaram resultado ainda mais pronunciado, com aumento da viabilidade de 64%, 69% e 74% em 24, 48 e 72h, respectivamente. As células tratadas com Qt3+OFT mantiveram-se 38% e 45% mais viáveis que as células tratadas apenas com quimioterápico, em 24 e 72h, respectivamente. As tratadas com Qt3+OP apresentaram resultado ainda mais significativo, com aumento da viabilidade de 52%, 64% e 68% em 24, 48 e 72h, respectivamente. Por citometria foi possível observar que OP e OFT, após 72h de cultivo, associados ou não a Qt, foram capazes de reverter efeito pró-necrótico do quimioterápico em maior concentração. Os resultados obtidos por HPLC sugerem presença de efeito dependente e independente de incorporação dos ácidos graxos n-3 na membrana celular. Conclusão: OFT e OP foram capazes de se contrapor ao efeito do quimioterápico nas condições estudadas, sendo o efeito do OP mais pronunciado. Palavras-chave: Óleo de peixe, óleo de fígado de tubarão, quimioterapia, linfócitos.

Abstract: Introduction: Chemotherapy used in the treatment of malignant neoplasms promotes leukopenia, which may lead to treatment suspension until immunity improves. Although there are many studies that show the immunomodulatory role of some lipids, little is known about the mechanism. Objectives: To evaluate the viability / proliferative capacity of lymphocytes after the incubation period in the presence of shark liver oil (SLO) or fish oil (FO) and/ or chemotherapy. Material and methods: Plasma mononuclear cells from healthy men aged from 20 to 30 years were collected and separated into 12 experimental groups for the evaluation of proliferative capacity (Alamar Blue®) in the presence of fish oil (FO) or shark liver oil (SLO) (complexed with fetal bovine serum - FBS), associated or not to chemotherapy (Ct), stimulated by mitogen concanavalin A (ConA). Apoptosis and cell necrosis were also evaluated after 72 hours of incubation by flow cytometry and presence of n-3 PUFA in the cell supernatant by HPLC. For the statistical test, data were submitted to One-Way ANOVA, followed by Tukey post-test, significance level p<0.05. Results and discussion: Results obtained with AlamarBlue® revealed that lymphocytes treated with OP or OFT chemotherapy showed greater cell viability than those submitted to chemotherapy alone. Cells treated with Ch1 + SLO remained 54%, 42% and 36% more viable than cells treated with chemotherapy alone at 24, 48, and 72h, respectively. Those treated with Ch1 + FO presented an even more significant result, with a viability increase of 64%, 69% and 74% at 24, 48 and 72h, respectively. Cells treated with Ch3 + SLO remained 38% and 45% more viable than cells treated with chemotherapy alone, at 24 and 72h, respectively. Those treated with Ch3 + FO presented an even more significant result, with a viability increase of 52%, 64% and 68% at 24, 48 and 72h, respectively. By cytometry it was possible to observe that FO and SLO, after 72h of culture, associated or not to Ch, were able to revert pro-necrotic effect of the chemotherapeutic in higher concentration. The results obtained by HPLC suggest the presence of a dependent and independent effect of n-3 fatty acids incorporation into the cell membrane. Conclusion: SLO and FO were able to reverse chemotherapy effect under the investigated conditions, with the effect of OP being more pronounced. Keywords: Fish oil, Shark liver oil, chemotherapy, lymphocytes.