Óleo de peixe previne o comportamento tipo-ansioso associado ao diabetes em roedores : suposto envolvimento da modulação nitrinérgica

Abstract

Resumo: A ansiedade é altamente prevalente em indivíduos com diabetes, sendo que os tratamentos atuais não são totalmente eficazes no alívio dos sintomas de ansiedade e frequentemente pioram o quadro glicêmico. Tem sido sugerido que um aumento desregulado na produção de óxido nítrico (NO) pode contribuir com a fisiopatologia que associa ansiedade e diabetes. Portanto, o melhor entendimento desses mecanismos juntamente com a procura por tratamentos mais eficazes são extremamente urgentes. Assim, o presente estudo avaliou o efeito do tratamento crônico com o óleo de peixe (OP), uma fonte de ácidos graxos poli-insaturados ômega-3 (AGPI-?3) que tem mostrado efeitos benéficos sobre respostas emocionais, assim como o envolvimento da via nitrérgica nas respostas comportamentais relacionadas com a ansiedade em animais diabéticos. Para este fim, um tratamento prolongado (4 semanas) e preventivo com OP (0, 1 ou 3 g/kg; gavagem) foi realizado antes dos animais tornarem-se diabéticos por injeção de estreptozotocina (DBT; 60 mg/kg; i.p.) e o tratamento continuou até completar 8 semanas, quando os animais foram submetidos aos seguintes testes de ansiedade - labirinto em cruz elevado (LCE) e transição claro/escuro (TCE). A seguir, uma imunohistoquímica para óxido nítrico sintase neuronal (nNOS) foi executada em regiões cerebrais relacionadas a ansiedade, como a amígdala (AMI), hipocampo (HIP; região CA3) e substância cinzenta periaquedutal dorsolateral (dlPAG). Por fim, para um melhor entendimento do envolvimento da via nitrérgica, animais DBT tratados com OP receberam antes dos testes de ansiedade uma injeção do precursor do NO L-arginina (200 mg/kg, i.p.) ou do inibidor da nNOS 7-NI (10 mg/kg, i.p.). Como esperado, os animais DBT tratados com veículo (VEI), quando comparado aos animais normoglicêmicos (NGL) tratados com VEI, mostraram uma resposta do tipo ansiosa mais pronunciada quando submetidos aos testes de ansiedade, a qual foi completamente prevenida pelo tratamento crônico com OP (3 g/kg; gavagem). Além disto, o tratamento foi capaz de prevenir o prejuízo da atividade locomotora e controlar os altos níveis de glicemia dos animais DBT. Em relação aos níveis de nNOS, o tratamento com OP também foi capaz de prevenir a expressão elevada de nNOS na AMI, HIP e dlPAG observados nos animais DBT tratados com VEI. Reforçando o envolvimento do NO no efeito tipo ansiol ítico, ambas as drogas administradas previamente (L-arginina e 7-NI) aboliram o efeito ansiolítico induzido pelo tratamento com OP. De modo geral, nossos dados suportam a hipótese de que uma desregulação na produção de NO em áreas encefálicas como AMI, HIP e dlPAG pode contribuir com mecanismos fisiopatológicos que associam a ansiedade e diabetes; e a prevenção da alteração na expressão de nNOS no encéfalo induzido por um tratamento preventivo prolongado com OP pode ser um mecanismo importante relacionado ao seu efeito do tipo ansiolítico. Palavras-chave: diabetes, ansiedade, óleo de peixe, óxido nítrico sintase neuronal, óxido nítrico.

Abstract: Anxiety is highly prevalent in individuals with diabetes, and current treatments are not totally effective in relieving anxiety symptoms and often impair the glucose control. An overproduction of nitric oxide (NO) may contribute with the pathophysiology that links anxiety and diabetes. Thus, the better understanding of the mechanisms involved along with the search for more effective treatments are extremely urgent. The present study evaluated the effect of preventive chronic treatment with fish oil (FO), a source of omega-3 polyunsaturated fatty acid (PUFA-?3), and the involvement of nitrergic pathway on behavioral responses related to anxiety in diabetic animals. For that, prolonged treatment (4 weeks) with FO (0, 1 or 3 g/kg; gavage) was performed before the animals become streptozotocin-diabetic rats (DBT; 60 mg/kg; i.p.) and the treatment continued until complete 8 weeks when animals were submitted to the following anxiety tests - elevated plus maze (EPM) and light/dark box (LDB). Next, an immunohystochemistry for neuronal NO synthase (nNOS) was performed in brain areas related to anxiety, lateral amygdala (AMY), hippocampus (CA3 region; HIP) and dorsolateral periaqueductal gray (dlPAG). Lastly, to better understand the involvement of the nitrergic pathway, DBT animals treated with FO received before the anxiety tests an injection of L-arginine (200 mg/kg, i.p.), a NO precursor, or 7-nitroindazole (10 mg/kg, i.p.), a nNOS inhibitor. As expected, DBT animals treated with vehicle (VEH), when compared to normoglycemic (NGL) animals treated with VEH, showed a more pronounced anxious-like response when tested in the anxiety tests, which was completely prevented by chronic FO (3g/kg; gavage) treatment. Moreover, this treatment was able to prevent the impairment on locomotor activity and control the high glycaemia levels from DBT animals. Interestingly, FO treatment was capable of preventing the high expression of nNOS in the AMY, HIP and dlPAG observed in VEH-treated DBT animals. Reinforcing the NO involvement in the anxiolytic-like effect, the previous treatment with both L-Arginine and 7-NI abolished the anxiolytic-like effect induced by FO treatment. Altogether, our data support the hypothesis that a dysregulation in the NO production in brain areas as AMY, HIP and dlPAG may contribute with the mechanisms that link anxiety and diabetes, and the prevention of changing in the brain nNOS expression induced by a preventive prolonged treatment with FO may be an important mechanism related to its anxiolytic-like effect. Keywords: diabetes, anxiety, fish oil, neuronal nitric oxide synthase, nitric oxide.